路君
- 作品数:3 被引量:5H指数:1
- 供职机构:复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金:上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域:生物学医药卫生更多>>
- 转录因子Pax4蛋白质转导功能的研究被引量:1
- 2009年
- 目的探讨胰腺相关转录因子Pax4是否具有蛋白质转导功能,及其进入细胞后的生物学功能。方法Ni柱亲和层析纯化原核表达的含His标签的Pax4全长蛋白质及一系列Pax4突变体与EGFP的融合蛋白。融合蛋白孵育的细胞,分别用于进胞检测和Pax4转导后的功能检测。结果外源纯化的Pax4蛋白能够转导进入HELF细胞。Paired-EGFP融合蛋白可以进入包括大鼠胰岛细胞在内的多种细胞。转导进入细胞的Pax4蛋白能够减少TNFα引发的胰岛细胞凋亡,增加胰岛细胞体外培养的存活率。结论研究结果表明转录因子Pax4具有蛋白质转导功能,完整的Paired结构域是Pax4的蛋白质转导结构域(PTD),外源纯化的Pax4蛋白在转导入胰岛细胞有抑制细胞凋亡的作用。
- 路君张舒羽卢大儒
- 关键词:胰岛细胞
- TAT-MafA融合蛋白诱导小肠细胞系IEC-6表达胰岛素被引量:4
- 2008年
- 借助蛋白质转导技术,利用胰岛β细胞转录因子MafA诱导小肠细胞系IEC-6表达胰岛素,为糖尿病的治疗提供新的方法。将TAT基因与MafA基因一起插入p32a(+)载体中,构建TAT-MafA融合蛋白原核表达载体,转化BL21获得表达菌株,经IPTG诱导和Ni柱亲和层析纯化TAT-MafA融合蛋白,用1μM浓度的该融合蛋白孵育IEC-6细胞12h和24h后,分别进行进胞检测和胰岛素表达检测。实验结果表明,细胞免疫荧光和Western-blot方法检测到经TAT-MafA融合蛋白作用12h后的IEC-6细胞中有该蛋白,并经细胞免疫荧光和RT-PCR的方法检测出TAT-MafA作用24h后的IEC-6细胞中有胰岛素的表达。因此,TAT-MafA融合蛋白可以高效进入小肠细胞系IEC-6细胞,并且进胞后仍保持MafA原有的生物学活性,能启动胰岛素基因的表达,诱导IEC-6成为胰岛素表达细胞。
- 罗海兰毋慧玲路君卢大儒沈坤堂金坚
- 关键词:蛋白质转导TATMAFA小肠上皮细胞胰岛素
- 胰腺发育相关转录因子蛋白质转导结构域的发现及应用研究
- 第一部分 蛋白质转导结构域(protein transduction domain,PTD)是一类具有跨膜活性的、富含碱性氨基酸残基的肽段。PTDs作为载体能够携带外源大分子进入细胞和活体动物组织。因此,无论在基础分子生...
- 路君
- 关键词:糖尿病胰岛细胞MAFA糖尿病小肠组织
- 文献传递