林欢
- 作品数：71 被引量：170H指数：7
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：黑龙江省科技攻关计划国家自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学一般工业技术医药卫生更多>>
- 鸡贫血病毒Taq Man探针荧光定量PCR检测方法的建立被引量：17
- 2009年
- 根据鸡贫血病毒(CAV)的基因序列,选取一段高度保守的基因序列作为目的片段设计引物与探针,将该目的片段克隆到pMD18-T载体中,作为阳性标准品。通过优化荧光定量PCR反应条件,建立了CAV的荧光定量PCR检测方法。结果表明,该检测方法的敏感性达到10个病毒拷贝/μL,与其他禽病病毒无交叉反应,批间与批内重复试验相关系数都小于5%。实验数据证明该检测方法敏感性高,特异性好,重复性佳。
- 宋修庆高宏雷王晓艳林欢宇文延青王永强王笑梅
- 关键词：鸡贫血病毒TAQ荧光定量PCR
- 鸡传染性法氏囊病病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：4
- 2009年
- 本试验根据GenBank中鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)基因组设计一对针对病毒vp5基因的引物和一条特异性Taq Man探针,建立了一种快速检测IBDV核酸载量的Taq Man荧光定量RT-PCR方法。通过对反应条件和反应体系的优化,使得该方法在108拷贝/μL～101拷贝/μL范围内具有良好的线性关系。能够灵敏地检测初始模板中30个拷贝的病毒核酸,其灵敏度是常规RT-PCR检测方法的100倍。该方法不与其它的禽源病毒发生非特异性反应,并且具有良好的重复性,为IBDV的定性定量检测提供了有效的工具。
- 王永强祁小乐高宏雷高玉龙宇文延青林欢秦立廷宋修庆王笑梅
- 关键词：鸡传染性法氏囊病病毒荧光定量RT-PCRTAQ
- 犬细小病毒弱毒疫苗株及其应用
- 本发明公开了犬细小病毒弱毒疫苗株及其应用。本发明将所分离的犬细小病毒强毒株通过细胞上传代，培育了犬细小病毒弱毒疫苗株，其微生物保藏号是：CGMCC No.3841。安全性和免疫原性试验结果表明，本发明弱毒疫苗株CPV-Y...
- 刘大飞姜一曈张洪英林欢戚亭
- 文献传递
- 汉坦病毒L基因的分段克隆及原核表达被引量：2
- 2012年
- 为原核表达汉坦病毒(HV)L蛋白,本研究根据HV 76-118株全长L基因序列分段设计合成了6对引物。通过RT-PCR方法分段扩增L基因的6个片段,分别克隆于原核表达载体pET-30a中,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。SDS-PAGE分析表明,获得与预期分子量一致的特异的目的蛋白。Western blot检测表明,重组蛋白与小鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性反应。
- 李茂中刘家森郭东春姜骞林欢曲连东
- 关键词：汉坦病毒原核表达
- 鸡传染性法氏囊病超强毒Gx与疫苗毒Gt在鸡体内的复制研究被引量：1
- 2012年
- 本试验利用鸡传染性法氏囊病超强毒Gx及其致弱疫苗毒Gt为对象,研究超强毒与弱毒株在鸡体主要免疫器官内的复制情况,以探讨两类毒株表现不同生物特性的原因。分别利用鸡胚半数致死量和鸡胚成纤维细胞半数感染量对超强毒Gx和疫苗株Gt进行病毒滴度的测定;再利用荧光定量RT-PCR对两类毒株进行病毒量的校准。以相同量的病毒对2周龄SPF鸡进行攻毒。攻毒试验表明超强毒Gx能造成47.5%的死亡,法氏囊、脾脏、胸腺等免疫器官均严重损伤;而疫苗毒Gt无致死,且未能造成任何病理可见的损伤。病毒的体内复制情况表明超强毒相对于疫苗毒复制更为迅速,病毒载量更高。
- 李久宽王永强康忠惠王琦高玉龙高宏雷祁小乐秦立廷林欢王笑梅许修宏
- 关键词：传染性法氏囊病病毒超强毒
- 抗鸡传染性法氏囊病病毒VP3单克隆抗体制备及抗原表位的初步分析被引量：7
- 2006年
- 用纯化的原核表达的IBDVVP3蛋白免疫6～8周龄的雌性BALB／c小鼠，经过3次免疫后，取其脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞进行融合，经过3次有限稀释，获得分泌抗IBDVVP3抗体的4株（HRB-7B、HAR-7C、HRB-3F、HRB-10E）杂交瘤细胞系。结果表明，4株杂交瘤细胞分泌的抗体均能够特异地与IBDVVP3蛋白反应，细胞上清EuSA效价均在5．0×10^2以上，腹水EuSA效价为6．4×10^6以上；相加ELISA及肽扫描结果表明，4株中仅HRB-7C和HRB-10E2株单抗针对的抗原表位相近，并利用肽扫描的方法初步定位4株单克隆抗体的抗原表位。本研究对进一步分析IBDV的结构与功能以及建立以表位为基础的抗原抗体诊断方法具有重要的意义。
- 程宇邓小芸高玉龙高宏雷林欢王晓艳王笑梅
- 关键词：传染性法氏囊病病毒单克隆抗体抗原表位
- 鸭肠炎病毒糖蛋白gB-gD主要抗原域的串联表达被引量：1
- 2013年
- 为了研究鸭肠炎病毒gB和gD基因串联表达后的免疫学活性,根据已发表的鸭肠炎病毒糖蛋白gB和gD基因序列设计两对引物,分别扩增了gB和gD基因主要抗原域,将其克隆到表达载体pPRO-EX—HTb中,构建重组表达质粒pHTb—gB-gD。将重组表达质粒pHTb-gB-gD转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达,SDS—PAGE表明:获得串联表达的gB和gD重组蛋白约60.5 Ku,与预期蛋白的分子质量一致,主要以包涵体的形式存在。Western-blot表明:串联表达的gB和gD重组蛋白可与鸭肠炎病毒阳性血清发生特异性反应,具有良好的抗原性。串联表达的gB和gD重组蛋白为下一步建立针对鸭肠炎病毒的诊断方法奠定基础。
- 王雅静郭东春刘家森王淑亚原冬伟姜骞林欢司昌德曲连东
- 关键词：鸭肠炎病毒糖蛋白D
- 鸭疫里默氏菌的分离鉴定及其对SPF鸭的致病性研究被引量：2
- 2013年
- 为研究鸭疫里默氏菌(RA)对SPF鸭的致病性,本实验室从不同省份疑似RA感染鸭场分离到4株细菌,经菌落形态观察、染色镜检、生化鉴定确定为RA。药敏试验表明这4个分离株对嗯诺沙星、氧氟沙星和先锋霉素V相对敏感,但对卡那霉素和庆大霉素均耐药。外膜蛋白A(OmpA)基因的克隆测序结果显示,4个RA分离株的ompA基因全长均为1 164 bp,编码387个氨基酸;核苷酸同源性为89%～100%。将5×108cfu的HLG1分离株经颈部皮下接种SPF鸭,病死SPF鸭的心、肝、脾、肺、脑和肾具有典型的病变。RA的分离鉴定技术为SPF鸭群RA的检测和监测以及为培育和净化SPF鸭作为RA的致病机理和疫苗研究中的实验动物模型奠定了基础。
- 帕提古丽.吾马尔郭东春张爱芹刘家森原冬伟姜骞林欢曲连东
- 关键词：鸭疫里默氏杆菌
- 同时检测小鼠微小病毒(MVM)和小鼠细小病毒(MPV)的荧光定量PCR的建立及应用
- 目的建立同时检测小鼠微小病毒(MVM)和小鼠细小病毒(MPV)的荧光定量PCR方法,并进行初步应用。方法比对NCBI上发表的MVM和MPV基因组序列,设计1对引物和探针,可同时检测MVM和MPV。考察MVM-MPV引物探...
- 王淑菁林欢付瑞李晓波王吉岳秉飞贺争鸣
- 关键词：荧光定量PCR
- 文献传递
- 鸡传染性法氏囊病病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立
- 根据GenBank中鸡传染性法氏囊病病毒基因组设计了一对针对病毒VP5基因的引物和一条特异的TaqMan水解探针,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测鸡传染性法氏囊病病毒核酸载量的TaqMan荧光定量RT-PCR方法...
- 王永强祁小乐高宏雷高玉龙宇文延青林欢秦立廷宋修庆王笑梅
- 关键词：鸡传染性法氏囊病毒荧光定量RT-PCR
- 文献传递
