司昌德
- 作品数：93 被引量：394H指数：10
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：黑龙江省科技攻关计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项黑龙江省科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生建筑科学更多>>
- 仙台病毒黑龙江省地方株的分离与鉴定被引量：4
- 2006年
- 目的自本省普通级实验动物中分离并鉴定出仙台病毒地方毒株,为建立仙台病毒血清抗体检测方法奠定基础。方法通过鸡胚尿囊腔传代自普通级小鼠肺脏分离病毒,经血凝实验、血凝阻断实验和结构基因序列测定对分离得到的病毒进行鉴定;大量繁殖病毒并通过蔗糖密度梯度离心纯化,免疫动物制备阳性血清,用标准试剂盒检测阳性血清效价。结果自150份小鼠肺脏分离到2株有血凝性的病毒,经形态学、血清学和结构基因序列测定鉴定为仙台病毒,命名为SV-HLJ。SV-HLJ与标准毒株Fushimi核蛋白基因(N)的核苷酸、氨基酸同源性分别为99·6%和99·0%。结论分离并鉴定出了仙台病毒黑龙江省地方毒株,为检测试剂盒的研制奠定了基础。
- 刘怀然张龄张天聪姜骞李昌文关云涛韩凌霞司昌德管海迪曲连东
- 关键词：仙台病毒
- HBK-SPF鸭生化位点检测方法的建立被引量：4
- 2010年
- 为了明确HBK-SPF鸭群的群体遗传学多态性,试验采用生化标记位点,参照国家标准《实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法》GB14927.1—2001,应用乙酸纤维素板,建立了HBK-SPF鸭生化标记位点的检测方法,对连续2个世代的HBK-SPF鸭进行检测。结果表明:酯酶-1(Es1)、转铁蛋白酶(Trf)、碳酸酐酶-2(Car2)、葡萄糖磷酸异构酶-1(Gpi1)、磷酸葡萄糖转位酶(Pgm1)、酯酶-10(Es10)等6种同工酶可以用于鸭的生化标记检测,重复性较好,对HBK-SPF鸭群进行分析发现存在多态性。
- 韩凌霞肖兵兵牛成明司昌德曲连东
- 慢病毒基因转移载体、其制备方法和应用
- 本发明公开了一种马传染性贫血病毒(EIAV)基因转移载体、其构建方法及其用途。本发明载体包含：CMV/R/U5启动子、5’非翻译区引导序列、部分5’gag基因编码区序列、中央聚嘌呤序列和EIAV的Rev反应元件、CMVI...
- 韩凌霞童光志曲连东司昌德于海波孟庆文姜骞刘家森孙成群
- 兔出血病病毒RT-PCR检测方法的建立及初步应用被引量：11
- 2006年
- 为快速检测兔出血病病毒,参照RHDV-TP株VP60基因序列(GenBank Ac-ession AF453761),在其5′端设计一对引物,扩增片段为386 bp,建立了检测兔出血病病毒的RT-PCR检测方法。经过对反应参数的优化,确定了反应的最佳条件。该方法在含多种已知病原的病料中,可特异性检出RHDV,检测病料的最高稀释度为10-5倍,且有很好的稳定性。临床样品检测结果显示,该方法的敏感性要高于血凝抑制试验,从而建立了RHDV特异、敏感的RT-PCR检测技术,可应用于RHDV临床诊断及流行病学调查。
- 胡迎东刘怀然司昌德刘家森韩凌霞姜骞曲连东
- 关键词：RT-PCR病原学检测
- 抗犬瘟热病毒重组核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：9
- 2007年
- 以纯化的重组犬瘟热病毒（CDV）N蛋白免疫BALB/c小鼠,应用常规杂交瘤技术获得两株能稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为A4C6C12和A5B8H7间接ELISA检测腹水效价分别为1：106、1：105;亚类鉴定结果分别为IgG2a、IgG2b,轻链均为K型;Western blot和ELISA分析结果显示2株单克隆抗体均能与重组N蛋白和CDV发生反应,而与犬细小病毒及犬腺病毒等无交叉反应;ELISA叠加试验的增值结果表明两株单克隆抗体识别的抗原位点不同.特异性抗CDV-rN的单克隆抗体的获得,为进一步用于临床诊断研究奠定了基础.
- 周洁姜骞张洪英刘家森刘立奎陈洪岩韩凌霞司昌德曲连东
- 关键词：犬瘟热病毒单克隆抗体
- SPF巴马小型猪的培育及应用被引量：3
- 2017年
- 利用我国自有资源巴马小型猪群,完成了疫病净化,建立了无特定病原体巴马小型猪实验猪群。制定了饲育标准、实验猪遗传学检测标准和微生物质量控制技术标准,制订了黑龙江省地方标准《无特定病原体猪微生物学监测技术规范》,对建立的猪群进行了遗传学和微生物质量控制。建立了猪瘟病毒(CSFV)和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染巴马小型猪感染模型。扩增了巴马小型猪重要细胞因子及固有免疫相关的重要分子,从分子水平进一步证明巴马小型猪可以代替家猪进行猪病感染实验。目前建立的猪群已广泛应用在猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪圆环病毒等猪重要疫病防控及致病机理的研究,实现了共享利用。本项目的完成解决了实验用猪瓶颈问题,提升了动物疫病研究水平,提供了新型实验动物,实现了优质种质资源共享利用,加速了生命科学研究和生物制品产业发展,推动了农业实验动物的行业进步。
- 姜骞韩凌霞司昌德林欢高彩霞郭东春张伟刘家森曲连东
- 关键词：巴马小型猪无特定病原体
- 鸭疫里氏杆菌外膜脂蛋白的表达及其免疫原性的分析被引量：1
- 2013年
- 为掌握鸭疫里氏杆菌Riean1110基因表达产物的免疫原性,根据GenBank上公布的鸭疫里氏杆菌DSM15868株(登录号为NC014738)的基因序列设计1对特异性引物,扩增了血清1型鸭疫里氏杆菌HLG1株的Riean1110基因。将其克隆到表达载体pPRO-EX-Htb中,构建重组表达质粒pHtb-RA1110,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,用IPTG诱导重组蛋白的表达。SDS-PAGE分析表明,诱导表达的目的蛋白的分子质量大约为56ku,与预期大小相符,以包涵体形式存在。Western-blot分析表明,诱导的重组蛋白能特异性地识别鸭疫里氏杆菌阳性血清,具有良好的抗原性。用纯化的Riean1110蛋白免疫SPF鸭,经ELISA检测,可产生高水平的抗体。结果表明,制备的重组Riean1110蛋白为建立鸭疫里氏杆菌的血清学检测方法奠定了基础。
- 帕提古丽.吾马尔郭东春张爱芹刘家森原冬伟姜骞林欢司昌德曲连东
- 关键词：鸭疫里氏杆菌原核表达免疫原性
- 不同MHC-B单倍型SPF鸡对禽白血病的抗性研究被引量：3
- 2014年
- 目的探索不同MHC-B单倍型SPF鸡对禽白血病(Avian leukosis,AL)的抗性差异,为建立AL抗性和易感鸡系提供实验依据。方法选择纯合G1、G5、G6鸡系及杂合G8鸡系雏鸡进行人工感染白血病病毒A亚群(Avian leukosis virus,ALV-A)RAV-1毒株实验,G8系雏鸡(6羽)作为对照。攻毒后对各鸡系的死亡率、病变率、血液中抗体水平以及外周血淋巴细胞的病毒载量等与抗性相关指标进行动态评估与统计学分析,最终确定抗性较强和较弱的鸡系。结果 G5系病变率和死亡率均明显高于其它攻毒鸡系,G1系最低,G6和G8系居中;G1系在攻毒后第5周开始,抗体效价一直高于其它鸡系,而G5系则最低,并且在攻毒后第8周至11周和第15周至18周,G1系的抗体效价显著高于G5系(P<0.05);G1系的病毒载量在攻毒后第7周至15周,低于其它鸡系,而G5系自攻毒后第9周至13周,极显著高于G1系(P<0.01)。结论 G1系在感染ALV后,死亡率较低,病变轻微,抗体保护力较强,且病毒的增殖较慢,因而其对AL具有较强的抗性,而G5系则相反较为易感。本研究不仅为建立AL抗性较强和较易感的鸡系提供了实验依据,而且对进一步阐明鸡主要组织相容性复合体(Major histocompatablity complex,MHC)多态性与AL抗病性的关系有重要作用。
- 廉传江周刚司昌德文辉强陈洪岩韩凌霞
- 关键词：SPF鸡禽白血病抗性
- 鸭肝炎病毒Ⅰ型结构基因vp1的原核表达及其抗原性分析被引量：4
- 2008年
- 通过RT-PCR方法克隆出DHV-1:161/79/V结构蛋白vp1基因片段,将其克隆到pMD18-T载体中,测序结果为714bp。vp1经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,亚克隆到原核表达载体pET-32a(+),获得重组质粒pET-VP1,转入E.coli Rosetta-gami(DE3) pLysS,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测结果表明在大肠杆菌中表达了1个相对分子量约为47ku的融合蛋白(Trx-His-VP1),将此融合蛋白用His-Ni+亲和层析法进行纯化。Western blot分析表明,Trx-His-VP1能与DHV-1阳性血清发生特异性反应,说明表达的结构蛋白VP1具有良好的抗原性。
- 甘一迪刘家森姜骞孟庆文韩凌霞司昌德曲连东
- 关键词：VP1基因原核表达
- SPF禽饲育室净化空调运行维护过程中的几点体会
- 2010年
- 净化空调是SPF级禽饲育室中的核心设备,它的作用主要是排出污染空气及有味气体,送入净化空气,保持各房间的压力梯度,保证动物的舒适及工作人员的健康,它是维持设施运行的重要因素,也是SPF级禽饲育室设备设施运行维护的重中之重。
- 张伟李艳华李昌文于海波韩凌霞司昌德曲连东
- 关键词：净化空调防冻节能
