林俊涵
- 作品数：4 被引量：13H指数：2
- 供职机构：福建师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 高通量脂肪酶稳定性测定法-ANS法的建立被引量：2
- 2011年
- 根据蛋白质变性后结构变化的特点和荧光探针8-苯胺基-1-萘磺酸（8-Anilino-1-naphthalenesulfonic acid,ANS）的特性,建立了一种快捷而准确的脂肪酶热稳定性（Tm）测定的新方法——ANS脂肪酶稳定性测定法,即将脂肪酶在25℃-65℃的不同温度下保温30 min后,加入到ANS反应体系（0.2 mg/mL酶蛋白,0.05 mmol/L ANS,20 mmol/L Tris-HCl（pH 7.2）,100-500 mmol/L NaCl）中。在激发波长378 nm,发射波长465 nm下测定荧光值。通过GraphPad Prism软件分析得出脂肪酶的Tm。利用该方法测定了野生型扩展青霉脂肪酶及其突变体的Tm值,结果与传统的NaOH滴定和平板透明圈法的测定结果相似。同时,利用该方法可在96孔板上快速完成数十个样品的Tm测定,从而成为一种快速、可靠、可用于高通量的酶稳定性的测定方法。
- 冯蔚宗林俊涵菜少丽邹有土陈国仁黄平林雅静王冰冰林琳
- 关键词：脂肪酶热稳定性
- K55R与ep8叠加突变对扩展青霉脂肪酶热稳定性的改善被引量：9
- 2007年
- 利用重叠延伸PCR对扩展青霉脂肪酶(PEL)基因进行体外定点突变,构建了K55R与随机突变体ep8叠加突变的重组质粒pAO815-ep8-K55R。将该质粒电转化引入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,进行异源表达。实验结果表明:该叠加突变体在毕赤酵母中获得了活性表达,得到表达产物脂肪酶PEL-ep8-K55R-GS。其表达量为508u/mL,分别约为野生型脂肪酶PEL-GS(627u/mL)的81%,随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS(924u/mL)的55%;其比活力为2309.1u/mg,与随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS和野生型脂肪酶PEL-GS的相仿。叠加突变脂肪酶PEL-ep8-K55R-GS的最适作用温度为37℃,与野生型脂肪酶PEL-GS和随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS一致;其Tm值为41.0℃,比野生型脂肪酶PEL-GS提高了2.3℃,比随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS提高了0.8℃。表明叠加突变脂肪酶PEL-ep8-K55R-GS的热稳定性有了进一步的提高。
- 蔡少丽林俊涵王彩梅林琳
- 关键词：扩展青霉脂肪酶叠加突变热稳定性
- Cryptococcus laurentii B40胞外脂肪酶的分离纯化及特性分析
- 罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii)B40是一株产胞外碱性高温脂肪酶的野生菌株。本文对其发酵培养基进行优化获得其最佳发酵配方,并通过硫酸铵沉淀、DEAE Sephadex A-25离子交换层析和 ...
- 王彩梅蔡少丽吴义真林俊涵章文贤施巧琴林琳
- 关键词：分离纯化脂肪酶
- 文献传递
- 多拷贝基因工程菌的构建及低温脂肪酶的定点突变
- 本研究采用细胞外基因操作方法构建了扩展青霉碱性脂肪酶(Penicilliumexpansum 1ipase，PEL)多拷贝表达质粒，并将表达质粒转化巴斯德毕赤酵母构建成多拷贝基因工程菌，有效地提高了PEL在巴斯德毕赤酵母...
- 林俊涵
- 关键词：扩展青霉碱性脂肪酶定点突变低温酶基因工程
- 文献传递
