蔡少丽 作品数:45 被引量:93 H指数:6 供职机构: 福建师范大学 更多>> 发文基金: 福建省自然科学基金 国家自然科学基金 公益性行业(农业)科研专项 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 化学工程 轻工技术与工程 更多>>
表达非洲猪瘟病毒CD2v与P12蛋白的重组伪狂犬病毒的构建 被引量:2 2021年 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)与伪狂犬病(pseudorabies,PR)分别由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)与伪狂犬病毒感染(Pseudorabies virus,PRV)引起的猪(或部分猪)高致死、传染性疾病。目前非洲猪瘟无商业化疫苗,两种疾病均给养猪业造成了巨大的经济损失。本研究以PRV-Fa经典毒株为载体通过CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/Cas9)基因编辑技术将ASFV(Pig/HLJ/18)CD2v(EP402R)与p12(O61R)基因分别插入PRV-Fa株TK(UL23)及gI(US7)基因位点中,成功构建TK及gI缺失且重组表达ASFV CD2v与P12的重组弱毒株PRV-∆gI(P12)-∆TK(CD2v)。通过基因测序、蛋白质免疫印迹(Western blot)与免疫荧光表明重组毒株遗传性状稳定且CD2v与P12在Vero细胞中稳定表达。通过一步生长曲线、噬斑生长测定、小鼠毒力测试及小鼠病理学评估表明与野生型毒株PRV-Fa相比重组毒株毒力明显减弱,对小鼠不具致死能力,该重组毒株为研究预防PR及ASF的新型疫苗提供了新的选择。 梁旺旺 李成龙 陈文智 丰志华 蔡少丽 陈骐关键词:非洲猪瘟 伪狂犬病毒 疫苗 重组疫苗 K55R与ep8叠加突变对扩展青霉脂肪酶热稳定性的改善 被引量:9 2007年 利用重叠延伸PCR对扩展青霉脂肪酶(PEL)基因进行体外定点突变,构建了K55R与随机突变体ep8叠加突变的重组质粒pAO815-ep8-K55R。将该质粒电转化引入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,进行异源表达。实验结果表明:该叠加突变体在毕赤酵母中获得了活性表达,得到表达产物脂肪酶PEL-ep8-K55R-GS。其表达量为508u/mL,分别约为野生型脂肪酶PEL-GS(627u/mL)的81%,随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS(924u/mL)的55%;其比活力为2309.1u/mg,与随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS和野生型脂肪酶PEL-GS的相仿。叠加突变脂肪酶PEL-ep8-K55R-GS的最适作用温度为37℃,与野生型脂肪酶PEL-GS和随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS一致;其Tm值为41.0℃,比野生型脂肪酶PEL-GS提高了2.3℃,比随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS提高了0.8℃。表明叠加突变脂肪酶PEL-ep8-K55R-GS的热稳定性有了进一步的提高。 蔡少丽 林俊涵 王彩梅 林琳关键词:扩展青霉脂肪酶 叠加突变 热稳定性 IFIT1负反馈上调干扰素β表达促进抗HSV-1病毒保护 被引量:2 2020年 Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)是危害人类健康的常见病原体之一,能够通过受损皮肤或黏膜感染宿主细胞并引起多种疾病。HSV-1的侵入激活先天免疫模式识别受体,诱导干扰素β(IFN-β)的产生,通过表达干扰素刺激基因(ISG)发挥抗病毒功能。近年来,干扰素诱导的四肽重复蛋白1(IFIT1)在病毒感染过程中的作用引起了广大研究者的关注。然而,其具体机制尚未完全清楚。本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了小鼠成纤维细胞(L929)IFIT1敲除细胞株,免疫印迹方法检测敲除细胞株IFIT1在蛋白质水平的表达。转染HT-DNA和Poly[I:C]刺激L929 WT和IFIT1敲除细胞株,实时定量PCR技术检测发现,HT-DNA刺激敲除细胞时,IFN-β及下游ISGs的表达量显著升高。IFN-β的表达量比L929-WT组平均高出13.4倍,IFIT1和趋化因子10(CXC chemokine ligand-10,CXCL10)的表达量比L929 WT组分别平均高出6.7倍和21倍(P<0.001),而Poly[I:C]刺激无明显变化(P>0.05),表明IFIT1是通过DNA信号通路来行使其负反馈调节作用。为研究IFIT1基因的抗病毒作用,利用CRISPR/Cas9技术改造的HSV-1-VP26-mCherry病毒感染该敲除细胞株,通过测定病毒荧光数及病毒拷贝数,发现IFIT1敲除细胞株与L929 WT细胞相比,存活率提高了60%(P<0.001),病毒增殖能力在48 h后降低28.6倍(P<0.001)。该结果表明,IFIT1基因的缺失有利于抵抗HSV-1的感染。综上所述,IFIT1通过DNA信号通路负反馈上调IFN-β及ISG的表达,IFIT1的缺失对病毒入侵发挥了保护作用。该结果为后续研究开发治疗HSV-1感染相关的治疗药物提供了一个新思路。 方义军 胡好 蔡少丽 丰志华 傅雅娟关键词:干扰素Β 过氧化氢酶高产菌株EIM-70的鉴定及产酶培养基的优化 被引量:1 2013年 [目的]对过氧化氢酶高产菌株EIM-70进行鉴定,并对其产酶培养基进行优化。[方法]对EIM-70菌株进行形态学分析及16SrDNA序列的系统发育进化分析,以鉴定其所属菌种;在采用单因素试验确定EIM-70产过氧化氢酶的最适碳、氮源基础上,采用Plackett-Burman试验设计筛选出对产酶影响显著的因子,再利用最陡爬坡试验和响应面分析法确定最适产酶培养基配方。[结果]试验将EIM-70菌株鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subitilis);EIM-70的最适产酶培养基为:葡萄糖19.25 g/L、NaNO39.25 g/L、FeSO4.7H2O2.46×10-3g/L、MgSO4.7H2O 0.50 g/L、Na2HPO4.12H2O 9.25 g/L、KH2PO40.60 g/L、2°麦芽汁,优化后Bacillus subitilis EIM-70的液体发酵产过氧化氢酶的活力可达6 927.45 U/ml,比优化前提高1.87倍。[结论]该研究为过氧化氢酶的工业化生产奠定了基础。 杨鹤 蔡少丽 李力 张爱平 黄建忠关键词:过氧化氢酶 枯草芽孢杆菌 从单个兔B细胞获得抗人cGAS蛋白单克隆抗体 2019年 为研究环鸟苷酸-腺苷酸合成酶入核的机制,利用兔外周血B细胞筛选抗人cGAS蛋白单克隆抗体.针对已三次免疫人cGAS(161-522)蛋白的新西兰兔,运用流式细胞术得到阳性效应B细胞,在单管里对单细胞裂解,得到总RNA,逆转录生成cDNA,两步巢式PCR扩增同一个B细胞来源的抗体重链和轻链可变区序列,抗体基因扩增成功率高达80%以上.293T重组表达兔抗人cGAS蛋白单克隆抗体并鉴定,获得1个具有较好结合特异性的兔抗人cGAS蛋白单克隆抗体,ELISA检测结果显示抗体的效价达1∶10 000. 傅雅娟 陈苏星 蔡少丽 蔡少丽 林莉莉关键词:单细胞 B细胞 抗体 扩展青霉PF898脂肪酶基因启动子DNA片段蚴能分析 通过长距离衔接头PCR(LA—PCR)方法克隆得到扩展青霉PF898脂肪酶基因5’端侧翼序列,经核酸数据库同源比对,发现该序列是一个新序列,提交GenBank数据库(GenBankaccession DQ677520).... 江贤章 蔡少丽 朱亚然 舒正玉 田宝玉 黄建忠关键词:脂肪酶 启动子 基因克隆 抗性基因 卡那霉素 文献传递 AMPK通过抑制STING调节干扰素免疫应答通路的研究 被引量:2 2020年 目的探索腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)与cGAS-STING通路之间的联系及其在先天免疫中扮演的角色。方法利用CRISPR/Cas9技术、蛋白质印迹、RT-qPCR等方法,探究AMPK对DNA相关免疫通路的调控机制。结果在HT-DNA和cGAMP刺激下,AMPK-/-细胞株的IFN-β的表达量明显高于野生型细胞株,但这种变化在RNA信号通路中并不明显;激活AMPK可以抑制细胞内的DNA信号通路;在DNA信号通路中,AMPK-/-细胞株相较于野生型细胞株,STING在RNA和蛋白水平上都明显升高,即AMPK对cGAS-STING通路的抑制很可能是通过抑制STING起作用。结论AMPK在调节cGAS-STING介导的干扰素免疫应答中起重要作用。 罗轩 田烁冉 李秋妹 蔡少丽 赖俊忠关键词:先天免疫 能量代谢 里氏木霉木聚糖酶的分离纯化及酶学性质 被引量:5 2013年 摘要采用冻干浓缩,硫酸铵盐析,SephacrylS-200HighResolution凝胶柱层析,HiTrapDesalting凝胶柱脱盐,HiTrap’TM SP(HP)离子柱层析对里氏木霉EIM-30的发酵液进行分离纯化,获得两个纯化的木聚糖酶组分,分别命名为XylanaseA和XylanaseB。纯化倍数分别为3.58和3.29,回收率分别为7.02%和28.29%。SDS—PAGE结果均为单一条带,分子质量分别为29.6ku和20.9ku。酶学性质研究结果表明:XylanaseA和XylanaseB的最适反应温度分别为55℃和60℃;温度低于50℃,两种酶的稳定性都很好;最适pH一样,都为5.0;pH稳定范围也一样,都为3.5~7.0;Mn2+、Tris对XylanaseA有激活作用,Fe2+、Cu2+、SDS则对该酶有抑制作用;Mn2+对XylanaseB有激活作用,Zn2+、Ca2+、Fe2+、Cu2+、Ba2+、Mg2+及SDS则对该酶有抑制作用。 蔡少丽 杨章萍 黄建忠关键词:里氏木霉 木聚糖酶 分离纯化 酶学性质 高效紫云英根瘤菌的选育 被引量:2 2018年 通过分离鉴定、回接及盆栽试验,筛选出能高效结瘤、具有高效固氮酶活性,能有效提高紫云英生物量的紫云英根瘤菌作为目标菌株,制备液体菌剂应用于田间试验并测定其效果。结果表明,本试验筛选出的3株目标菌株均发挥了根瘤菌优越的生物固氮作用,增加了根瘤菌数量,提高了紫云英的生物学产量,并以GL-L-6菌株表现为最优。 李晶 蔡少丽 林金新关键词:根瘤菌 紫云英 生物固氮 Epstein-Barr病毒的免疫调控与逃逸机制 被引量:8 2016年 EB病毒(Epstein-Barr Virus,EBV)属于γ疱疹病毒科,是第一个被发现与人类肿瘤相关的DNA病毒。EB病毒通过激活Toll样受体(Toll like receptors,TLRs)信号通路,诱导I型干扰素的大量释放和功能性的自噬机制,从而引起机体的免疫应答。然而,相对于其他疱疹病毒,EB病毒已进化出更为精细且错综复杂的机制来破坏和逃逸宿主的免疫系统,如限制自身蛋白表达、活化宿主的泛素-蛋白酶体系统、干扰或逆转自噬与泛素化修饰等。这些机制会引发EB病毒在宿主体内的持续性感染,导致宿主免疫功能失调,引发EB病毒相关疾病(如鼻咽癌、传染性单核细胞增多症等)。因此,研究EB病毒特异性的免疫调控机制不仅对深入理解EB病毒的潜伏性感染和致癌性至关重要,而且还将为EB病毒诱发的相关疾病的免疫预防与治疗鉴定出新的潜在靶点。此文主要阐述了EB病毒调控宿主免疫应答和逃逸先天免疫应答的分子机制。 肖楠阳 陈骐 蔡少丽关键词:EPSTEIN-BARR病毒 肿瘤 TLRS 免疫逃逸