向庭秀
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 发文基金：重庆市卫生局科研项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 幽门螺杆菌尿素通道蛋白UreI基因的克隆、表达及纯化
- 2009年
- 目的构建幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)尿素通道蛋白基因UreI的原核表达载体,并在E.coliBL21中表达,为进一步研究UreI的功能奠定基础。方法从前期已构建好的融合表达质粒pET32a(+)/UreI中,酶切目的基因UreI,并胶回收目的基因片段,将目的基因UreI与载体pQE3.0分别经HindIII和KpnI双酶切、纯化、连接,转化并筛选含有目的基因的重组质粒pQE30/UreI,并在E.coliBL21中表达,表达产物经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,用SDS-PAGE及Western blot分析。结果经KpnI、HindIII双酶切后,小片段大小为585bp,为插入的基因片段HpUreI基因,经KpnI、NbaI双酶切,小片段为1749bp,与实验设计相一致。重组质粒pQE30/UreI经SDS-PAGE分析显示,在原核细胞中得到了高效表达,目的蛋白分子量为21kD左右,以包涵体形式表达。通过Quantity-one软件分析,其表达量约占菌体总蛋白的20%。经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,其纯度达90%以上,Western blot分析显示,该目的蛋白可被6-His鼠抗单克隆抗体所识别,具有良好的免疫原性。结论成功地克隆和构建了原核表达载体pQE30/UreI,并在原核细胞中得到了高效表达。
- 杨丽娟姜政王静向庭秀张特君
- 关键词：幽门螺杆菌原核表达
