杨丽娟
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：宁夏医科大学附属医院更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局科研项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 幽门螺杆菌尿素通道蛋白基因UreI载体的构建、融合表达及纯化被引量：1
- 2008年
- 目的构建幽门螺杆菌(H.pylori,Hp)尿素通道蛋白基因UreI的融合表达载体,并在E.coliBL21中表达,为进一步研究UreI的功能奠定基础。方法利用分子克隆技术以Hp DNA染色体为模板,扩增Hp UreI基因片段,将目的基因UreI与载体pET32a(+)分别经kpnⅠ和HindⅢ双酶切,纯化,连接。筛选阳性重组载体,转化大肠杆菌BL21,以IPTG诱导表达pET32a(+)/UreI融合蛋白。表达产物经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,用SDS-PAGE及Western blot分析。结果经酶切、测序分析表明,插入的基因片段为Hp UreI编码基因,由585 bp组成,与GenBank相应菌株HP AM417 609序列完全一致,无碱基突变。经SDS-PAGE分析显示重组质粒pET32a(+)/UreI在原核细胞中得到了高效融合表达,其重组融合蛋白分子量为130 ku,经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,其纯度达95%以上,Western blot分析显示,该重组融合蛋白可被6-His鼠抗单克隆抗体所识别,具有良好的反应原性。结论成功地克隆和构建了原核表达载体pET32a(+)/UreI,并在原核细胞中得到了高效融合表达。
- 杨丽娟姜政向廷秀陶小红王丕龙
- 关键词：幽门螺杆菌原核表达
- 幽门螺杆菌尿素通道蛋白基因UreI的真核载体构建、表达及抗原性研究
- 2009年
- 目的构建含人幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)尿素通道蛋白编码基因(UreI)的真核表达的重组载体,并在COS-7细胞中表达,为核酸疫苗的开发奠定基础。方法以原核表达质粒pET32a(+)/UreI为模板,扩增UreI编码基因片段,将目的基因与同样进行酶切、纯化的载体pEGFP-N1进行连接,而后转化并筛选含有目的基因的重组载体pEG-FP-N1/UreI,并在COS-7细胞中表达,以荧光蛋白和Western blot法检测其表达产物。结果经酶切、测序证实插入的基因片段为H.pyloriUreI蛋白编码基因;荧光显微镜下和Western blot法等检测显示,该重组质粒能够在COS-7细胞中表达目的蛋白,同时能够被H.pylori阳性患者血清所识别。结论成功地构建了真核重组载体pEGFP-N1/UreI,并在COS-7细胞中表达。
- 周静杨丽娟袁媛向廷秀姜政王丕龙
- 关键词：幽门螺杆菌核酸疫苗真核表达载体
- 幽门螺杆菌尿素通道蛋白UreI基因的克隆、表达及纯化
- 2009年
- 目的构建幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)尿素通道蛋白基因UreI的原核表达载体,并在E.coliBL21中表达,为进一步研究UreI的功能奠定基础。方法从前期已构建好的融合表达质粒pET32a(+)/UreI中,酶切目的基因UreI,并胶回收目的基因片段,将目的基因UreI与载体pQE3.0分别经HindIII和KpnI双酶切、纯化、连接,转化并筛选含有目的基因的重组质粒pQE30/UreI,并在E.coliBL21中表达,表达产物经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,用SDS-PAGE及Western blot分析。结果经KpnI、HindIII双酶切后,小片段大小为585bp,为插入的基因片段HpUreI基因,经KpnI、NbaI双酶切,小片段为1749bp,与实验设计相一致。重组质粒pQE30/UreI经SDS-PAGE分析显示,在原核细胞中得到了高效表达,目的蛋白分子量为21kD左右,以包涵体形式表达。通过Quantity-one软件分析,其表达量约占菌体总蛋白的20%。经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,其纯度达90%以上,Western blot分析显示,该目的蛋白可被6-His鼠抗单克隆抗体所识别,具有良好的免疫原性。结论成功地克隆和构建了原核表达载体pQE30/UreI,并在原核细胞中得到了高效表达。
- 杨丽娟姜政王静向庭秀张特君
- 关键词：幽门螺杆菌原核表达
- 幽门螺杆菌尿素通道蛋白研究进展被引量：1
- 2007年
- 幽门螺杆菌是人类最常见的致病菌,我国普通人群的感染率为50%～80%,而且仍以每年1%～2%的速度增加。H.pylori感染与人B型胃炎和消化性溃疡的发生有密切关系,同时与MALT淋巴瘤和胃癌以及胃肠外疾病也有重要的关系。实验证明H.pylori能够导致蒙古沙鼠胃癌的发生,故已被世界卫生组织国际癌症研究机构列入第一类致癌原。抗生素在H.pylori根除及其相关疾病治疗方面取得了较大进展,但其毒副作用明显、疗效不稳定,
- 杨丽娟姜政
- 关键词：幽门螺杆菌H.PYLORI感染MALT淋巴瘤世界卫生组织消化性溃疡胃肠外疾病
