本研究通过制备鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus,Lr)菌毛蛋白Fim I特异性抗体,建立了Lr菌落免疫印迹计数与分离方法。将重组Fim I蛋白(r Fim I)免疫BALB/c小鼠获得抗血清,用Western和全菌Dot-Blot鉴定抗血清的反应性和特异性,建立基于r Fim I抗血清的菌落免疫印迹方法,并对模拟样品(小鼠肠道菌群+Lr)以及灌胃小鼠粪便中的Lr进行定量分析。结果显示获得的r Fim I抗血清效价为1:51200,该血清和Lr裂解蛋白和菌体均呈强阳性反应,与小鼠肠道菌群没有交叉反应。菌落免疫印迹中r Fim I抗体最佳浓度为1:2000,所有含有Lr样品的菌落转印膜上都能呈现清晰的免疫印迹,测定的阳性菌落数和模拟样品中预设的Lr浓度一致,并能较好的反应灌服Lr的小鼠粪便中Lr的消长趋势。本研究建立的菌落免疫印迹方法为肠道样品中Lr的选择性计数和分离提供了快捷的方法。
