刘娜
- 作品数：10 被引量：19H指数：3
- 供职机构：石河子大学农学院园艺系更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划引导项目国家自然科学基金国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 葡萄病毒B的RT-PCR检测技术研究
- 从感染葡萄病毒B的葡萄皮层中提取总RNA，以其为模板合成cDNA第一链并进行PCR扩增，同时利用提取的总RNA为模板进-步RT-PCR扩增，二者均能获得与预期片段大小一致长约460 bp的扩增产物;回收PCR特异扩增产物...
- 杨相昆赵英刘娜牛建新王林代永欣
- 关键词：RT-PCR检测技术重组质粒同源性
- 文献传递
- 枣树植原体快速PCR检测体系研究
- 2011年
- 依据已获得的16S rDNA序列,通过BLAST和DNAman软件分析其同源性,找到其保守序列,并设计出NTF1/NTR1、NTF2/NTR1、NTF3/NTR1、NTF1/NTR2、NTF2/NTR2、NTF3/NTR2共5对引物序列,通过优化,筛选出了适宜的PCR检测体系,通过检测验证,该体系能很好地应用于枣疯病植原体的检测。利用优化的检测体系对新疆部分样品进行检测,发现灰枣品种的个别样品携带植原体。
- 高静涛牛建新王雪莲刘娜叶春秀张飞
- 关键词：枣疯病植原体
- 核桃早实性相关SCAR标记(1-1_(500))基因末端序列的克隆被引量：2
- 2011年
- 【目的】克隆SCAR标记的核桃早实性相关基因片段[1](AFLP早实分子标记转化成的SCAR标记)的末端序列,为验证其功能和早实核桃分子育种奠定基础。【方法】采用RACE技术对SCARE标记的核桃早实性相关基因片段设计特异性PCR引物,并扩增其末端序列。【结果】分别获得了长度为453 bp和463 bp的片段,通过与NCBI核酸数据库中已经发表的序列进行比对分析,发现该基因3′末端含有358个核苷酸非编码序列。其核酸序列与葡萄假定蛋白相应部位同源性为55.26%,与葡萄重叠群相应部位同源性为38.38%,与线虫粘粒Y38F2AR基因全序列相应部位相似性为40.86%,和野猪免疫球蛋白超家族成员相应部位的相似性为39.75%,具有poly(A)尾。5′末端含有248个核苷酸非编码序列,其核酸序列与葡萄重叠群基因组鸟枪全序列相应部位同源性为39.07%,与拟南芥基因组DNA 3号染色体相应部位的同源性为42.22%,与嗜热四膜虫假定蛋白基因序列相应部位相似性为44.53%,和斑马鱼DNA序列DKEY-120E17克隆2号连锁群全序列相应部位相似性为42.30%。【结论】试验采用的3′和5′末端快速扩增技术(3′RACE和5′RACE技术)能很好地扩增核桃早实性相关基因的末端序列。
- 朱天丁牛建新叶春秀刘娜张飞
- 关键词：核桃基因工程
- 枣疯病植原体的分子检测与同源性鉴定被引量：3
- 2011年
- 【目的】采用植原体16S通用引物建立枣疯病植原体PCR检测体系。【方法】采用植原体16S rDNA通用引物R16mF1/R16mR1,对陕西和山西具有枣疯病的枣树植株总DNA进行PCR扩增,获得了相关的枣疯病植原体序列。采用DNAMAN软件分析其同源性,绘制系统进化树。运用pDRAW32软件对17种具有16S rDNA分组的典型的限制性内切酶进行计算机模拟RFLP,确定枣疯病植原体同源性关系。【结果】从陕西和山西的枣疯病的植株中,分别得到1 433 bp和1 432 bp的条带,与已报道的枣疯病植原体比较,同源性达到99%以上,而与其他植物的植原体16S rDNA同源性多低于93%,并且与16S rDNA V-B组的遗传距离最近。pDRAW32软件模拟RFLP结果表明它们和已报道的JWB的RFLP图谱相似。【结论】枣疯病植原体归属于16SrDNA V-B,为枣疯病植原体PCR检测体系提供了理论基础。RFLP分析进一步验证了枣疯病植原体属于16SrDNA V-B,具有随地域变异性较小的特性,这将有利于不同地区枣疯病检测技术的建立。
- 高静涛牛建新王雪莲刘娜叶春秀张飞朱天丁
- 关键词：枣疯病植原体分子检测同源性
- 基于PCR-RFLP梨品种cpDNA遗传多态性的分析被引量：5
- 2010年
- 为了研究库尔勒香梨等19个主要梨品种的cpDNA遗传多态性,采用PCR-RFLP进行分析,利用10对通用引物对总DNA进行扩增,并且采用7种限制性内切酶对PCR产物进行酶切,应用DPS v7.05版软件计算Jaccard相异系数,采用非加权类平均法(UPGMA)进行0-1系统聚类分析。结果显示:7对引物(cp01、cp02、cp03、cp04、cp06、cp09、cp10)能在梨属植物上扩增出1条特异性谱带,cp09/MvaI,cp03/Hin6I的酶切位点有显著差异。根据结果分析,库尔勒香梨与鸭梨、砀山梨、苹果梨、早酥、慈梨、金川雪梨、锦丰、新疆句句梨的平均距离系数较小,与其他梨的平均距离系数较大。
- 杨长红牛建新叶春秀刘娜
- 关键词：CPDNAPCR-RFLP遗传多态性
- 梨树苹果茎痘病毒PRINS检测中引物的设计及退火温度的测定被引量：1
- 2011年
- 【目的】利用5条引物目的片段进行扩增,完成PRINS检测中引物及其退火温度的测定。【方法】采用确认带有ASPV的库尔勒香梨叶片,以叶片为试验材料,并采用经RT-PCR检测技术健康香梨的叶片作为阴性对照。引物采用NCBI提供的BLAST工具中的ASPV病毒的全基因组序列的外壳蛋白的保守区域进行设计。并根据PRINS特有的性质及ASPV病毒有片断相互重叠现象来设计相应的引物。【结果】这5条引物之间没有太多的干扰,且都在目的区域出现了比较清晰的条带。【结论】证明所设计引物可以在进一步的PRINS检测ASPV病毒时直接使用,为PRINS在梨树病毒检测方面发挥更大的作用奠定了基础。
- 吴庆丰牛建新李文慧刘娜
- 关键词：引物原位标记引物病毒
- 利用原位RT-PCR技术检测库尔勒香梨中苹果茎沟病毒被引量：3
- 2008年
- 以已知带有苹果茎沟病毒的香梨的叶片为材料,研究了香梨病毒叶片石蜡切片IS-RT-PCR检测技术。应用了直接原位RT-PCR反应,简化了试验步骤,缩短了试验周期,确定了苹果茎沟病毒在叶片中的分布位置。试验中设置了多种阴性对照,结果表现为:阴性对照组织中均未显现蓝紫色,而阳性材料组织的一些细胞表现出明显的蓝紫色,说明苹果茎沟病毒在叶片中主要分布于细胞中的栅栏组织。
- 黄翯牛建新刘娜
- 关键词：库尔勒香梨苹果茎沟病毒
- 苹果茎痘病毒库尔勒香梨分离物外壳蛋白基因的原核表达被引量：1
- 2010年
- 【目的】苹果茎痘病毒为潜隐性病毒,该病毒寄主范围和分布广泛,能侵染多种果树。目前侵染新疆库尔勒香梨,造成了严重的经济损失,研究了解ASPV的功能基因及治病机理,并诱导其表达,制备出高效的血清,将病害的损害度降到最低。【方法】用新疆库尔勒香梨携毒枝条的韧皮部提取苹果茎痘病毒RNA,根据已经公布ASPV(EU095327)核苷酸序列,设计合成1对CP基因的引物,通过RT-PCR扩增出CP基因,将其克隆至表达载体pET-3a中。【结果】经测序表明,目的基因CP已正确地整合至表达质粒中。【结论】重组质粒转化大肠杆菌BL21,在不同时间下诱导均获得了表达,且表达蛋白产物的分子质量大小与预期值一致,并可被特异性抗体所识别。
- 李文慧赵英牛建新刘娜叶春秀
- 关键词：苹果茎痘病毒CP基因克隆原核表达
- 库尔勒香梨mRNA差异显示技术体系的建立被引量：3
- 2011年
- 为了研究库尔勒香梨萼片脱落与宿存的本质,试验以库尔勒香梨盛花前期的同一时间同一棵树同一花序的第2位序花和第4序位花为试验材料,采用mRNA差异显示的方法进行研究。扩增体系为20μL:cDNA 2.0μL,10μmol/L锚定引物2.0μL,10μmol/L随机引物2.0μL,2.5 mmol/L dNTPs 2.0μL,5 U/μL Taq 0.25μL,10×PCR buffer 2.5μL,ddH2O 9.25μL。结果显示,扩增产物经6%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染,获得了比较清晰的差异条带,回收并克隆差异条带,分离得到一些差异表达的片段,优化了库尔勒香梨mRNA差异显示技术,为克隆差异表达基因的全长cDNA奠定了良好基础。
- 张飞牛建新叶春秀刘娜高静涛朱天丁
- 关键词：库尔勒香梨萼片MRNA差异显示
- 鸭梨苹果茎痘病毒外壳蛋白基因克隆及原核表达被引量：1
- 2011年
- 为了进一步明确苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)的分子变异及株系分化,制备相应特异性抗血清。本研究以库尔勒地区种植的感染ASPV的鸭梨(Y)枝条韧皮部为试材,采用RT-PCR技术扩增ASPVCP基因,克隆、测序,获得了鸭梨分离物外壳蛋白(ASVPCP-Y)基因,将该CP基因连接到表达载体PET-28a上,转化到大肠杆菌BL21(DE3),1mmol/LIPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析。研究结果表明,获得的鸭梨ASPVCP基因全长1194bp,推测编码397个氨基酸,与已报道的ASPV分离物的氨基酸序列同源性为70%左右。进化分析结果显示,ASPVCP基因的分离物可聚为三个类群:第一类群的寄主为苹果,第二类群的寄主为梨(除了NC_003462,苹果),ASPVCP-Y归入第三类群。CP基因在大肠杆菌中诱导表达,其融合蛋白分子量约为42kD。克隆的鸭梨ASPVCP基因及构建的原核表达载体为制备ASPV重组CP基因多克隆抗体及ASPV的分子生物学的进一步研究奠定了基础。
- 刘娜牛建新
- 关键词：苹果茎痘病毒外壳蛋白原核表达
