贾红
- 作品数：152 被引量：192H指数：7
- 供职机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项国家科技支撑计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学文化科学更多>>
- 表达非洲猪瘟病毒B602L-B646L蛋白的重组腺病毒及构建方法
- 本发明公开了一种表达非洲猪瘟病毒B602L‑B646L蛋白的重组腺病毒及构建方法，属于基因工程技术领域，本发明利用重组腺病毒穿梭载体pENTRE‑EGFP‑TOPO，经过一系列中间过程，得到重组腺病毒载体pAD‑CMV‑...
- 朱鸿飞贾红鑫婷郭晓宇袁维峰崔帅王洋
- 文献传递
- 非洲猪瘟病毒A104R蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2022年
- 为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)重组蛋白A104R(rA104R)及研制抗rA104R的多克隆抗体,本研究通过ExPASy等在线生物信息学软件初步预测该蛋白的理化性质、信号肽、核定位信号等信息,继而合成ASFV的A104R基因,构建基于pET-28a(+)载体的原核表达系统。重组蛋白用Ni亲和层析纯化后,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blotting和液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术鉴定。纯化的蛋白免疫6~8周龄BALB/c小鼠,制备抗rA104R的多克隆抗体,通过Western blotting和间接酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定其反应性和免疫原性。结果显示,原核表达载体构建成功;重组菌在37℃诱导8 h后表达量最高,在包涵体和上清中均有表达,表明其呈部分可溶性表达;纯化的重组蛋白大小约16 kDa,且反应性良好;LC-MS分析结果显示,该rA104R蛋白多个肽段均与目标蛋白的氨基酸序列相匹配,匹配率为59%;制备的鼠源抗rA104R多克隆抗体效价大于1∶2048000,具有良好的免疫原性。结果表明,本研究制备的rA104R及其多克隆抗体可进一步用于生物学功能研究,并可为疫苗及相关诊断试剂研制提供基础材料。
- 蒋亚君王召阳崔帅王洋鑫婷郭晓宇刘雪婷陈世钰房立春朱鸿飞贾红
- 关键词：非洲猪瘟病毒原核表达液相色谱-质谱
- 非洲猪瘟病毒O174L蛋白的真核表达载体构建及分子特征分析
- 2024年
- 为分析非洲猪瘟病毒O174L基因,通过同源重组方式将O174L基因连接至p RK5M-C-2×Strep载体,构建重组质粒,经PCR扩增和测序鉴定正确后,将重组质粒转染至猪小肠上皮细胞系(porcine intestinal columnar epithelial cells,IPEC-J2)中,通过免疫荧光和Western blot检测O174L蛋白的表达情况。PCR及测序结果显示,p RK5M-C-2×Strep-O174L重组质粒构建成功。免疫荧光和Western blot检测结果显示,O174L蛋白能够在IPEC-J2细胞中稳定表达。生物信息学分析结果显示,基于O174L基因和B646L(p72)基因序列构建各分离毒株的2个系统发育树间排列高度相似。来自中国的16株分离株中,O174L基因序列的相似性高达96.76%~100.00%。其中,与中国爆发的其他Ⅱ型分离株相比,China/2018/Anhui XCGQ在O174L蛋白的第67、75及110位氨基酸存在差异,GZ201801在第110位氨基酸存在差异。Ⅰ型分离株SD/DY-I/2021和HeN/ZZ-P1/2021的O174L蛋白的氨基酸序列分别在第13、73、93、95、113和114位上与其他中国Ⅱ型分离株存在差异。O174L蛋白为稳定的亲水蛋白,没有信号肽和跨膜区;其二级结构由α螺旋、β折叠和无规则卷曲组成,三级结构预测结果与二级结构预测相符。以上结果为深入研究ASFV O174L蛋白与宿主间的相互作用和遗传进化提供了基础。
- 沙嘎那日·吉日木图林晓沈兆基郭肖蓉李奎贾红周荣
- 关键词：非洲猪瘟病毒真核表达分子特征
- 基于甲病毒复制子的猪繁殖与呼吸综合征DNA疫苗的构建及在BHK-21细胞上的表达特性
- 2013年
- 以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)FZ06A株全长cDNA为模板,扩增并修饰GP3、GP5、M蛋白的基因,同时融合牛疱疹病毒VP22基因,构建了基于甲病毒复制子的PRRSV DNA疫苗pSCA-VPm3、pSCA-VPm5、pSCA-VP6和pSCA-V56。将其分别转染BHK-21细胞,通过检测转染细胞中目的基因的mRNA水平、目的蛋白的表达水平和转染细胞的凋亡情况,对该疫苗的体外表达特性进行初步研究。结果显示,PCR扩增得到长度分别为765、603、525bp的GP3、GP5、M蛋白的基因。经置换、敲除、融合VP22基因等修饰后获得长度分别为1 545、1 386、1 320bp的修饰后基因。疫苗转染细胞后,用RT-PCR能检测到目的蛋白的mRNA。IFA和Western-blot结果显示,转染细胞中均有目的蛋白表达,转染48h后细胞发生核固缩,甚至核裂解现象。证实,成功构建了基于甲病毒复制子的疫苗pSCA-VPm3、pSCA-VPm5、pSCA-VP6和pSCA-V56,在转染的BHK-21细胞中能实现目的蛋白的表达,且能诱导转染细胞发生凋亡。
- 梁欠欠侯绍华李秀岭贾红袁维峰鑫婷孙建涛朱鸿飞
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 基于甲病毒复制子的PRRSV DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答
- 2013年
- 本研究旨在构建含PRRSV FZ06A株GP3、GP5、M蛋白修饰后基因的复制子疫苗pSCA-Km5、pSCAVPm3、pSCA-VPm5、pSCA-VP6和pSCA-V56,研究其特异性表达目的蛋白的能力和在小鼠体内诱导免疫应答的能力。将构建的复制子质粒和空载体以100μg·只-1的剂量免疫小鼠,免疫3次,监测血清中特异性抗体和中和抗体水平及淋巴细胞经特异性抗原刺激后的增殖情况和释放IFN-γ、IL-4的水平。结果显示,各疫苗均能在转染细胞中高效表达目的蛋白。免疫小鼠,pSCA-VPm3、pSCA-VP6能引起较好的细胞免疫应答,但血清中未检测到特异性抗体。pSCA-Km5、pSCA-VPm5血清中能检测到低水平特异性抗体,但引起的细胞免疫较pSCA-VPm3、pSCAVP6低。pSCA-V56和pSCA-VPm5-PEI均能诱导细胞免疫反应和体液免疫反应,但体液免疫水平低于pSCAVPm5。pSCA-VPm5-PEI抗体水平在首免后7周突然降低,至首免后10周,无特异性抗体再次产生。所有免疫小鼠中未能检测到中和抗体。结果表明,构建的基于甲病毒复制子的PRRS DNA疫苗能诱导动物机体产生一定水平的细胞免疫和体液免疫,有望成为具有开发价值的PRRS标记疫苗。但各目的基因所能诱导机体产生体液免疫和细胞免疫的能力不同。
- 梁欠欠侯绍华贾红袁维峰郭晓宇朱鸿飞
- 关键词：PRRSV小鼠免疫应答
- 犬细小病毒JS12株VP2基因的分子特征及其在大肠杆菌中的表达被引量：4
- 2013年
- 从犬细小病毒病免疫预防失败病犬体内分离到1株犬细小病毒（CPV），命名为CPV—JSl2株。病毒可凝集猪的红细胞，对乙醚不敏感，pH3不能灭活病毒，pHl0可使病毒失去感染性，56。C作用60min病毒仍有活性，80℃作用30min可灭活病毒。序列分析时CPV—JSl2为CPV-2a亚型，VP2基因全长1755nt，编码584aa，与国外CPV毒株VP2基因的核苷酸序列和氨基酸序列的同源性分别在98．9％～99．6％和98．39／6～99．7％之间，与国内和周边地区毒株VP2基因的核苷酸序列和氨基酸序列的同源性分别在99．0％～99．7％和97．9％～99．7％之间；16个中国分离株处在不同组，CPV—JSl2株与韩国毒株DH426处在同一分支上，亲缘关系较近。对CPV—jsl2与免疫毒株VP2蛋白的立体结构分析比较，发现有9处氨基酸残基变异，其中6处位于衣壳蛋白表面，5处位于抗原表位区。将VP2基因在大肠杆菌中表达，重组VP2蛋白的分子质量为67．0ku，主要以包涵体的形式存在；Western—blot分析中重组VP2蛋白可与CPV阳性血清发生特异性反应。以纯化的重组VP2蛋白为抗原建立的CPV抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性。
- 李月华王永山毕振威夏兴霞欧阳伟刘华洁贾红姚火春
- 关键词：犬细小病毒VP2基因分子特征病毒变异原核表达间接ELISA
- 一种牛结核病检疫注射装置
- 本实用新型公开了一种牛结核病检疫注射装置，属于兽医设备技术领域，包括针筒，针筒内活动插接有活塞，活塞的右端固定连接有推杆，推杆的右端固定连接有把手，针筒的左端螺纹连接有第二螺纹环，第二螺纹环的左端固定连接有连接头，连接头...
- 鑫婷贾红袁维峰朱鸿飞郭晓宇侯绍华姜一曈
- 文献传递
- 细粒棘球蚴EG95s重组蛋白免疫原性分析
- 目的：分析EG95s重组蛋白的免疫原性。方法：本研究分别诱导表达含有1、2、3拷贝EG95s的pET-1EG95s、pET-2EG95S和pET-3EG95s重组质粒，并用Hi S亲和纯化HIS-lEG95 S、HIS-...
- 贾红袁维峰侯绍华郭晓宇马世春朱鸿飞
- 关键词：基因工程疫苗细粒棘球蚴重组蛋白免疫原性哺乳动物
- 一种免疫佐剂标准品制备用装置
- 本实用新型公开一种免疫佐剂标准品制备用装置，包括：箱体，箱体顶端设置有箱盖，箱盖的一侧与箱体铰接，箱体一侧外壁固接有控制面板；震荡机构，震荡机构包括支撑板、限位滑动部和往复驱动部，箱体一相对内壁均固接有限位滑动部，支撑板...
- 吉日木图贾红朱鸿飞庞忠宝姜一曈袁维峰黄颖翟文竹何宇恒蒋思文李鸿洋
- 牛结核病诊断标志物及其应用
- 本发明提供了牛结核病诊断标志物及其应用，本发明利用非靶向蛋白质组学技术筛选、靶向蛋白质组学技术验证获得了能够区分牛结核病阴、阳性的标志物，其为IL‑8、CRP。本发明提供的牛结核病诊断标志物能够鉴别待检牛是否为牛结核病阴...
- 鑫婷贾红高新桃郭晓宇姜一曈朱鸿飞侯绍华林伟东
- 文献传递
