沈勤
- 作品数：44 被引量：116H指数：5
- 供职机构：南通大学航海医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- iNOS基因在胶质细胞中转录激活机制初探
- 2005年
- 目的:通过瞬时转染p38MAPK途径中上游激酶:组成激活型MAPK激酶3(MKK3b)和MAPK激酶6(MKK6b),进一步了解p38MAPK级联传导信号系统调节iNOS基因在胶质细胞中的转录激活机制。方法:MKK3b或MKK6b与接有荧光素酶(luciferase,Luc)的大鼠iNOS启动基因质粒(iNOS-Luc);cAMP反应元件(CRE-Luc)和核因子κB(NFκB-Luc)联合转染C6胶质细胞株。结果:MKK3b/MKK6b能引起iNOS-Luc的激活,并都能够被p38MAPK抑制剂SB203580所抑制。MKK可以诱导cAMP反应元件(CRE-Luc)介导的和核因子κB(NFκB-Luc)依赖的转录活性。显性抑制型(dominantnegative,dn)CRE结合蛋白(dnCREB)和CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBP)都是p38MAPK的靶向作用目标。结论:转染这两种转录因子产生相反的影响:dnCRE增强了iNOS-Luc的表达,而dnC/EBP则引起抑制作用,对CRE-Luc也具有相同的影响。
- 沈勤张然施建华殷冬梅顾建兰
- 关键词：P38MAPK核因子胶质细胞联合转染
- NIDD基因TaqMan探针的制备及其在实时荧光定量PCR方法中的应用被引量：2
- 2006年
- 目的:制备NIDD基因TaqM an探针建立检测NIDD基因荧光定量PCR(FQ-PCR),以进一步研究NIDD的表达情况。方法:采用RT-PCR法,从出生后一天的SD大鼠脑组织mRNA中扩增NIDD基因的部分编码序列区(CDS)片段,克隆入pGEM-T载体,筛选阳性克隆、酶切鉴定及序列测定。采用TaqM an探针,以重组质粒为模板绘制标准曲线。结果:RT-PCR法扩增出一特异产物与预期长度112 bp相符,DNA序列测序的结果与GeneBank提供的已知序列(AB098078)比较,所克隆的NIDD基因片段与其中的112 bp完全相同,与NIDD基因100%同源。以重组质粒为模板绘制标准曲线,相关系数r大于0.99,反应效率显示为1,各点变异系数小于10%。结论:采用RT-PCR和T载体技术成功制备出可应用于FQ-PCR的NIDD基因TaqM an探针。
- 沈勤陈梦玲沈爱国严美娟史淑贤程纯
- 关键词：实时荧光定量PCRTAQMAN探针
- 姜黄素对脂多糖激活的小胶质细胞iNOS表达的抑制及抗氧化作用被引量：27
- 2007年
- 用姜黄素预处理小胶质细胞株BV,1h后加用脂多糖(200ng/ml)进行刺激,通过MTT检测细胞活性;硝酸还原酶法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)的含量;Western印迹、免疫细胞化学染色检测细胞活化后形态及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白的表达;瞬时转染和荧光素酶报告基因鉴定iNOS和NF-κB基因表达活性;SOD和GSH-Px检测姜黄素的抗氧化能力.结果证明,脂多糖可促使小胶质细胞活化,使iNOS和NF-κB基因表达活性显著增强;iNOS蛋白表达明显上调,NO释放增多;细胞内SOD和GSH-Px活性明显下降.而姜黄素(10μmol/L)可以显著抑制活化后小胶质细胞NO的产生、iNOS蛋白的表达及iNOS-Luc、NF-κB-Luc的表达活性,其机制可能通过NF-κB的信号转导途径抑制iNOS的表达.姜黄素可通过提高细胞内SOD和GSH-Px的活性发挥抗氧化作用.
- 杨开艳顾建兰殷冬梅沈勤
- 关键词：小胶质细胞姜黄素诱导型一氧化氮合酶
- 医学留学生生物化学实验教学的实践与探索被引量：5
- 2010年
- 随着国际交流与合作的日益频繁,留学生教育已成为中国高等教育的一个重要组成部分,生物化学实验是医学留学生的必修重要课程之一,因此,生物化学实验课的教学质量对学生的全面发展非常重要。通过对留学生生物化学实验教学的实践,根据留学生自身的特点和生物化学实验课程的特点,对我校留学生的生物化学实验教学进行了有益的实践与探索。结果显示留学生生物化学实验课的教学质量取得了显著提高。
- 吴娟娟沈勤殷冬梅
- 关键词：医学留学生生物化学实验教学教学方法
- O-GlcNAc糖基转移酶表达下调对tau蛋白磷酸化的影响
- 2008年
- 目的:以人O-GlcNAc糖基转移酶(OGT)基因为靶点,研究小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对HEK293T细胞中OGT基因表达的抑制作用,以及这种抑制作用对tau蛋白磷酸化与糖基化修饰的影响。方法:根据人OGT基因序列特点,设计高效且特异性强的siRNA。用脂质体转染siRNA进入HEK293T细胞,通过实时PCR检测siRNA对OGT基因表达的抑制。用蛋白免疫印迹法检测tau蛋白糖基化与磷酸化修饰的变化。结果:设计的siRNA能够有效抑制OGT基因的表达,与空白组相比,抑制效率可达78.1%左右。OGT基因表达的下调使tau蛋白糖基化水平下降,而磷酸化水平增高。结论:tau蛋白的糖基化负调节其磷酸化,葡萄糖摄入减少或代谢降低可能在阿尔茨海默尔病的发生发展中起关键作用。
- 杨江勇施建华沈勤
- 关键词：TAU蛋白RNA干扰
- p38MAPK介导的胶质细胞iNOS的转录激活机制被引量：7
- 2005年
- 丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)酶级联反应系统参与胶质细胞中iNOS的合成.通过瞬时转染p38MAPK途径中上游激酶,MAPK激酶3(MKK3)和MAPK激酶6 (MKK6 )表达质粒,进一步了解p38MAPK级联传导信号系统调节iNOS基因在胶质细胞中的转录激活机制.MKK3或MKK6表达质粒与接有荧光素酶(luciferase ,Luc)的大鼠iNOS启动基因质粒(iNOS Luc)联合转染C6星形胶质细胞株引起iNOS Luc的激活,并且使细胞因子诱导的iNOSmRNA的表达增强.这两种效应都能够被p38MAPK抑制剂SB2 0 35 80所抑制.MKK3 6也可以诱导核因子κB(NFκB Luc)依赖的转录活性.这些分子水平的研究结果为p38MAPK信号级联传导途径在调节大鼠胶质细胞中iNOS基因转录激活中的重要作用,包括转录因子NFκB的作用提供了证据.通过阻断iNOS表达或NO的生成,抑制细胞炎症发生,为防治神经细胞炎症反应性疾病提供实验依据.
- 沈勤张然吴扬施建华
- 蛋白激酶A催化微管相关蛋白tau磷酸化的研究被引量：3
- 2006年
- 目的:研究蛋白激酶A(PKA)对微管相关蛋白tau的磷酸化作用。方法:采用免疫印迹技术,利用位点特异性、磷酸化依赖的tau蛋白抗体,检测PKA对tau蛋白磷酸化作用的位点特异性及磷酸化作用动力学。用双倒数作图,计算PKA催化tau磷酸化以及各个位点磷酸化的Km值,并结合培养细胞的实验,研究PKA对tau蛋白磷酸化作用的位点特异性。结果:PKA催化tau蛋白在Ser214,Ser262,Ser409三个位点磷酸化,而且各位点磷酸化作用的Km值不同,PKA对Ser214的Km值最低,即对Ser214位点的亲和性最高,催化其磷酸化的能力最强。在细胞实验中,也显示了PKA引起Ser214位点的磷酸化最明显。结论:PKA催化tau蛋白在Ser214,Ser262,Ser409三个位点磷酸化,其中Ser214是PKA催化tau磷酸化反应的最好位点。
- 施建华钱慰丁绍红尹晓敏沈勤刘飞
- 关键词：TAU蛋白激酶A磷酸化
- 与PD发病相关基因PINK1的表达调控机制的初探
- 目的:本研究借助eQTL分析,结合分子生物学方法,探讨PINK1基因表达的调控机制,通过对该基因的表达数量性状基因座(eQTL)分析,初步确定该基因表达的上游调节基因位点,构建该基因的表达调节网络通路。方法:1.采用美国...
- 沈勤殷冬梅吴娟娟黄超兰杜青青
- 关键词：相关基因PINK1
- 文献传递
- 开设医学本科生PCR实验的教学体会
- 2013年
- 结合分子生物学中PCR实验的开设,从实验前的各项准备工作到学生实验的教学过程及实验课后的思考等方面进行分析和总结,得到一些实践体会,以期为今后的实验教学改革提供参考。
- 贾辛殷冬梅翟旭光钱慰沈勤
- 关键词：生物化学分子生物学实验教学PCR
- 医学生物化学中多元教学模式的实践被引量：5
- 2010年
- 生物化学课程是基础医学与临床医学的纽带,在医学基础教学中占有十分重要的地位。提高生物化学教学质量面临着教与学双重考验。通过精心选择案例,外加归纳总结构建知识体系,并辅以前沿知识的渗透,多方位启发学生思考讨论,激发学生的学习兴趣,体会生化知识的学以致用,收到良好的教学效果。
- 殷冬梅沈勤
- 关键词：医学生物化学教学模式案例式教学法
