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变异链球菌重组质粒pEGFP-N1-SrV+的构建及真核表达: 龋病是一种以细菌为主的多种因素共同作用的牙体硬组织疾病，变异链球菌（S.mutans，简称变链菌）是目前公认的主要致病菌之一。变异链球菌在牙面粘附、聚集、增殖和产酸是其致龋的主要过程，因此，阻断变异链球菌在牙面粘附、聚集...; 于晓光; 关键词：变异链球菌 DNA疫苗绿色荧光蛋白; 文献传递

变形链球菌表面蛋白可变区真核载体质粒pEGFP—N1-SrV＋的构建及在293T细胞的表达被引量：2: 2011年; 目的构建变形链球菌（变链菌）表面蛋白可变区（extended-v）真核表达质粒pEGFP—N1-SrV＋，并转架哺乳动物细胞293T，为进一步研究该区功能奠定基础。方法根据已报道变链菌OMZl75的srv＋基因序列，化学合成SrV＋的编码基因srv＋，将真核载体质粒pEGFP—N1和srv＋基因片段分别用KpnⅠ／XhoⅠ双酶切，连接获取重组质粒pEGFP-N1-Srv＋，并对其进行PCR、酶切和测序鉴定。通过H旨质体法瞬时转染哺乳动物细胞293T。运用荧光显微镜观察、Westernblot及real-timePCR法橙。目的蛋白在293T细胞中的表达情况。结果通过基因化学合成技术，获得1136bp的目的基因srv＋，经测序鉴定与模板目的基因序列一致；成功构建真核表达质粒pEGFP-N1-SrV＋；PCR扩增检测可获得1．33kb目的基因片段；KpnI／XhoI双酶切可见4．7kb和1．1kb两条电泳条带，证实重组质粒pEGFP-N1-SrV＋携带目的基因；通过荧光显微镜观察到重组质粒pEGFP．N1-SrV＋融合GFP后的表达，目的细胞的转染效率达到80％以上；Westernblot检测到相对分子质量（Mr）为72×10^3处有特征条带，其大小和Srv＋融合蛋白（42×10^3＋28×10^3=70×10^3）相吻合；real-timePCR数值分析显示：在293T细胞中，s邢＋基因的过表达效果显著。结论成功构建了真核表达载体质粒pEGFP-N1-SrV＋，并能够在哺乳动物细胞293T中表达。; 何奎芳于晓光潘乙怀刘建国亓庆国; 关键词：变形链球菌 293T细胞

嵌合体真核表达质粒pVAX1-SPG的构建及表达研究被引量：1: 2015年; 目的:构建含变异链球菌表面蛋白Spa P的P区编码基因spap-P和葡聚糖结合蛋白Gbp A的葡聚糖结合区编码基因gbd的嵌合体真核表达质粒p VAX1-SPG,并观察其在哺乳动物细胞293T中的表达。方法:通过基因工程技术构建嵌合体真核表达质粒p VAX1-SPG,并采用脂质体转染法将其转染至293T细胞中;然后分别采用免疫组化SABC法和Western-blot检测嵌合蛋白Spa P/P-GBD在真核细胞中的表达。结果:重组真核表达质粒p VAX1-SPG经酶切、测序鉴定证实,其所携带的外源基因片段为2.4 kb的目的基因片段,序列同源性为99%;免疫组化染色结果显示,经p VAX1-SPG转染的293T细胞胞质呈棕褐色染色;Western-blot检测结果显示,分子量为72 k Da的嵌合蛋白Spa P/P-GBD能够被正确表达。结论:构建成功的嵌合体真核表达质粒p VAX1-SPG能在真核细胞293T中正确表达目的蛋白。; 王怡丹孙天瞳刘建国柴巧学曲云鹏于晓光白国辉田源韩琪; 关键词：变异链球菌表面蛋白抗原葡聚糖结合蛋白真核表达

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于晓光

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