葛剑辉
- 作品数：7 被引量：11H指数：2
- 供职机构：扬州大学动物科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 鸡胚原始生殖细胞定向诱导分化成骨细胞的研究
- 2007年
- 探讨体外培养的鸡胚胎原始生殖细胞(EPGCs)的多向分化潜能。分别从发育至19期和28期的鸡胚胎性腺中获取EPGCs,体外培养传代。通过地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C诱导EPGCs向成骨细胞分化,分别进行碱性磷酸酶改良钙钴法染色鉴定、钙结节Von Kossa's染色鉴定和免疫组化鉴定。结果表明:EPGCs被诱导21 d后,定向分化成成骨细胞,诱导率达到80%,碱性磷酸酶改良钙钴法染色、钙结节Von Kossa's染色和免疫组化鉴定均呈阳性,阳性率为75%-85%。由此可得出在诱导条件下,EPGCs体外可定向诱导分化为成骨细胞。
- 葛剑辉孙国波魏彩霞孙鹏翔李碧春
- 关键词：成骨细胞分化
- 诱导鸡胚精原干细胞向成骨细胞分化的研究被引量：2
- 2007年
- 为了探讨体外培养的鸡胚精原干细胞（SSCs）的多向分化潜能，取孵化18～20d的鸡胚睾丸，无菌获取SSCs，体外培养传代，通过地塞米松、B一甘油磷酸钠、维生素C诱导鸡胚SSCs向成骨细胞分化，钙结节Von Kossa’s法、改良的钙钴法及免疫组化法进行成骨细胞鉴定。结果显示SSCs被诱导15～21d后分化为成骨细胞，诱导形成率为75％～80％；诱导后的细胞Von Kossa＇s染色可见细胞间布满黑色颗粒，提示有矿化基质沉积；改良钙钴法碱性磷酸酶染色胞浆呈深棕色或深黑色，免疫组化法染色细胞呈阳性。因此可以得出在不同的诱导条件下，SSCs体外可被定向诱导分化为成骨细胞，证明其具有多向分化潜能。
- 魏彩霞孙国波葛剑辉李碧春
- 关键词：成骨细胞分化
- 鸡胚胎原始生殖细胞转染EGFP基因的研究被引量：1
- 2007年
- 于鸡胚19期分离生殖嵴原始生殖细胞(PGCs),用于体外培养和传代扩增;对其第2代PGCs进行组织化学法鉴定,采用3种转染方法以增强型绿色荧光蛋白转染PGCs,并对电穿孔方法转染条件进行优化,荧光显微镜下计数细胞,分析PGCs转染效率,探讨有效的转染方法及其优化条件。结果表明:电穿孔方法可获得较高的转染效率,其最优化条件:电场强度为280 V,时间常数为60μs,质粒浓度为15μg.mL-1,转染后室温静置10 min。
- 孙鹏翔陈昊葛剑辉孙国波余飞陈国宏赵文明李碧春
- 关键词：鸡胚胎原始生殖细胞增强型绿色荧光蛋白转染
- 鸡胚精原干细胞定向诱导分化为成骨细胞的初探被引量：1
- 2007年
- 研究体外定向诱导鸡胚精原干细胞(Spermatogonial stem cells,SSCs)向成骨细胞分化的能力。采用地塞米松+β-磷酸甘油钠+维生素C组成的诱导液对鸡胚精原干细胞进行诱导,利用Von Kossa’s法、改良的钙钴法及免疫组化I型胶原(CollagenⅠ)进行成骨细胞特性鉴定。结果表明:诱导后成骨细胞形成率达到82%,诱导后的细胞经Von Kossa’s染色可见细胞间布满黑色颗粒,提示有矿化基质沉积;改良钙钴法碱性磷酸酶染色胞浆呈深棕色或深黑色,免疫组化法染色细胞呈阳性。因此可以得出:鸡精原干细胞(SSCs)具有向成骨细胞分化的能力。
- 孙国波葛剑辉魏彩霞孙鹏翔戴建明李碧春
- 关键词：精原干细胞成骨细胞分化
- 鸡胚原始生殖细胞定向诱导分化为脂肪和神经元样细胞被引量：1
- 2008年
- 目的探索培养传代后鸡胚原始生殖细胞（EPGCs）的多向分化潜能,比较不同诱导程序、不同特异性化学诱导剂及其协同作用。方法分别获取发育至19期和28期的鸡胚PGCs,体外培养传代到第4代。采用不同诱导程序、不同组合的诱导剂地塞米松、胰岛素、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（IBMX）诱导EPGCs向脂肪细胞分化。采用不同诱导程序、不同组合的诱导剂维甲酸（RA）、丁化羟基苯甲醚（BHA）I、BMX、二甲基亚砜（DMSO）诱导EPGCs向神经元样细胞分化。结果1.EPGCs被诱导7～21d后,分化成脂肪细胞,其中诱导程序（2）（见正文中叙述）的诱导分化效果较好,第192、8期分化率分别为89%和91%。诱导剂联合协同作用的诱导效果极显著地（P〈0.01）高于单独作用的诱导效果。诱导的脂肪细胞经特异性的油红O和苏丹红染色为阳性,并检测到特异性过氧化物酶体增生物激活受体γ（PPAR-γ）的表达。2.EPGCs被诱导3～7d后,分化成神经元样细胞,RAI、BMX单独使用对神经元样细胞的形成率分别为82%和83%,极显著地（P〈0.01）高于RA、BHA、DMSO和IBMX的协同作用的效果。诱导的神经元样细胞特异性免疫组织化学检测显示,均有神经元特异性烯醇化酶（NSE）和神经丝蛋白M（NFM）的表达,而无胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。结论鸡EPGCs体外培养传代后仍具有多向分化潜能,在特异化学物质的诱导下,可被定向诱导分化为脂肪细胞、神经元样细胞。
- 李碧春葛剑辉徐琪秦洁包文斌赵文明吴信生蔡琳琳陈国宏
- 关键词：原始生殖细胞脂肪细胞神经元样细胞分化鸡胚
- 猪皮肤组织块冷冻保存方法的研究被引量：7
- 2008年
- 以二甲基亚砜、甘油和乙二醇为冷冻保护剂,以3种浓度(10%、20%、30%)在2种降温条件下探讨适合猪耳皮肤组织冷冻保存的最适条件和方法以及复苏后对皮肤组织生长能力的影响。结果表明:快速冷冻条件下各处理均无组织块生长。慢速冷冻条件下复苏后组织块的存活率均为100%,各冷冻保护液3种浓度的平均生长率分别为14.29%、56.52%和8.70%,差异显著。20%甘油保护液下采用慢速冷冻方法复苏后组织块的生长率达82.35%,极显著高于其他组和对照组。新鲜和冻存后的细胞培养均采用组织块培养法,EDTA-牛血浆贴覆,97.78%的新鲜样本组织块能较好生长,且扩展能力强。
- 程旭梅倪黎纲吴晓伟孙鹏翔葛剑辉戴建明李碧春
- 关键词：冷冻保存体外培养
