田仁礼
- 作品数：27 被引量：29H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗肾细胞癌异种化G250抗原基因疫苗的构建及真核表达被引量：1
- 2009年
- 目的:构建含有人肾细胞癌特异性抗原G250主要T细胞表位区域、猴和鼠G250部分片段区域融合基因tG250的真核表达质粒,并在猴肾COS7细胞中表达。方法:通过基因合成和PCR技术构建人、猴和鼠G250区域融合基因tG250,将其插入含有人Igκ链前导信号肽(sig)、人IgG-Fc和糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定信号肽融合基因序列的细胞膜锚定修饰真核表达载体pCI-Fc-GPI中;将重组质粒pCI-Fc-tG250-GPI转染COS7细胞,流式细胞仪和免疫荧光检测其表达情况。结果:tG250融合基因经测序正确,PCR和酶切鉴定证明已成功连入真核表达载体pCI-Fc-tG250-GPI中;流式细胞仪和免疫荧光检测显示,重组质粒pCI-Fc-tG250-GPI在COS7细胞中得到很好的表达。结论:成功构建了重组质粒pCI-Fc-tG250-GPI,且在COS7细胞中可以有效表达,为以G250抗原为靶点基因疫苗的后续功能研究打下良好基础。
- 田仁礼高江平阎谨琦贾锐张亮李韧韩刚董金凯于继云
- 关键词：肾肿瘤基因表达
- 一种可复制型肾癌治疗性DNA疫苗
- 本发明公开了一种可复制型肾癌治疗性DNA疫苗，是将复合基因sig‑tG250‑Fc‑GPI‑IRES‑GM/B7插入可复制型DNA疫苗载体pSVK中得到的。该疫苗是一种可以诱导自身抗肿瘤免疫反应的DNA疫苗，疫苗本身的安...
- 于继云阎瑾琦田仁礼李云奇肖毅张巍张亮王宇刘宁
- 文献传递
- 肾癌相关抗原G250-MN/CAⅨ在肾癌疫苗和免疫治疗研究中的应用被引量：2
- 2007年
- 肿瘤疫苗主要是通过肿瘤相关抗原,尤其是肿瘤特异性抗原,激活免疫系统产生针对肿瘤的特异性免疫反应来达到治疗目的。G250在肾细胞癌中的特异性表达使它成为肾癌疫苗潜在的靶抗原和肾癌免疫治疗的重要靶分子。本文主要针对以G250-MN/CAⅨ为特异性靶点的肾癌疫苗和免疫治疗研究进展作一综述。
- 张亮田仁礼阎瑾琦于继云
- 关键词：癌症疫苗靶抗原
- 携带p53AIP1基因的重组复制缺陷型腺病毒载体的构建、鉴定及其在人宫颈癌细胞系HeLa中的表达
- 2013年
- 目的构建携带外源性p53调节的凋亡诱导蛋白1(p53AIP1)基因重组复制缺陷型腺病毒载体,观察其在HeLa细胞中的表达。方法设计针对p53AIP1基因序列并插入特定酶切位点的特异引物,通过PCR扩增p53AIP1基因序列,利用DNA重组技术将p53AIP1基因定向插入到腺病毒穿梭载体pDC316,构建穿梭质粒pDC316-p53AIP1;在LipofectamineTM2000介导下穿梭载体pDC316-p53AIP1和腺病毒骨架载体pBHGloxΔE1,3Cre共转染进HEK293细胞;通过Cre-loxP重组酶系统,使Shuttle质粒和辅助大质粒发生定点重组从而包装产生携带目的基因p53AIP1的复制缺陷型重组腺病毒(Ad-p53AIP1)。将Ad-p53AIP1和Ad-null按MOI=100感染HeLa细胞,应用Western blot法检测蛋白水平的表达。结果基因片段成功连入pDC316载体上,对所构建新载体分别行PCR扩增、酶切、测序鉴定,与预计一致。Western blot法检测证实,Ad-p53AIP1感染HeLa细胞后蛋白有表达。结论成功构建携带p53AIP1基因的重组复制缺陷型腺病毒载体,并且有较强的感染能力。
- 林晓亮姜云波赵倩殷小涛田仁礼李云奇徐元基阎瑾琦张巍高江平于继云
- 关键词：腺病毒载体HELA细胞基因治疗
- SPRY2正向调节TNF-α诱导的成纤维细胞瘤L929细胞毒作用被引量：1
- 2014年
- 目的探索SPRY2分子在肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的L929细胞毒作用中的调节作用。方法应用RT-PCR方法观察SPRY2基因在不同质量浓度TNF-α刺激作用下表达水平的变化;应用重组腺病毒介导SPRY2基因过表达方法观察其对TNF-α细胞毒活性的调解效应。结果 L929细胞中存在SPRY2基因的天然表达,并且其表达水平随TNF-α刺激质量浓度的升高而升高,过表达SPRY2基因促进TNF-α诱导的L929细胞死亡。结论 SPRY2分子在TNF-α介导的肿瘤细胞杀伤效应中发挥正向调节作用。
- 朱静潆杜芝燕王芳殷小涛田仁礼王启宇武帅张巍
- 关键词：TNF-ΑL929细胞细胞毒性
- 一种可复制型肾癌治疗性DNA疫苗
- 本发明公开了一种可复制型肾癌治疗性DNA疫苗，是将复合基因sig-tG250-Fc-GPI-IRES-GM/B7插入可复制型DNA疫苗载体pSVK中得到的。该疫苗是一种可以诱导自身抗肿瘤免疫反应的DNA疫苗，疫苗本身的安...
- 于继云阎瑾琦田仁礼李云奇肖毅张巍张亮王宇刘宁
- 提高树突状细胞腺病毒感染效率的融合蛋白的表达及活性鉴定
- 2014年
- 目的构建表达靶向树突状细胞融合蛋白CT40L的原核表达载体,在大肠杆菌中表达,并对CT40L融合蛋白进行纯化鉴定及功能验证。方法从GenBank上查找柯萨奇病毒和腺病毒受体(CAR)、T4噬菌体fibritin和小鼠CD40L的基因序列,并将其主要功能区域连接形成拼接序列;序列进行原核表达密码子优化后将其克隆至原核表达载体pET42a(+),构建重组表达载体pET42a-CT40L,并将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达CT40L/GST融合蛋白,并采用GST琼脂糖凝胶纯化重组蛋白。纯化后的重组蛋白经Western blot法、间接ELISA鉴定其免疫活性。结果重组表达载体经NcoⅠ和EcoRⅠ酶切鉴定正确;IPTG诱导后经SDS-PAGE分析表明获得了相对分子质量(Mr)78 000大小的重组蛋白;纯化后的蛋白纯度达到90%。Western blot法和ELISA检测证实纯化的CT40L分子能够与特异性抗体及相应受体发生反应,表明该融合蛋白具有良好的免疫学活性。结论成功构建了原核表达载体pET42a-CT40L,利用大肠杆菌表达系统实现了融合分子的可溶性表达,纯化后CT40L融合蛋白经检测具备较高的免疫学活性。
- 田仁礼殷小涛王伟林晓亮朱晓明徐元基阎瑾琦张巍高江平于继云
- 关键词：CD40L靶向治疗原核表达
- β-hCG蛋白在大肠杆菌系统的表达、纯化及活性鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的获得β-人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)融合蛋白β-hCG/GST并验证其抗原活性。方法利用PCR法扩增β-hCG全长基因,将其克隆至原核表达载体pET-42a中,构建重组质粒pET-42a-β-hCG,将该重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中IPTG诱导表达,经SDS-PAGE分析,亲和层析法纯化融合蛋白,目的蛋白用Western blot法鉴定,ELISA检测纯化得到的融合蛋白的抗原活性。结果测序结果证实成功扩增出目的基因β-hCG;酶切和测序结果证实pET-42a-β-hCG原核表达载体构建成功;转化后可以成功诱导并纯化出大小与预期一致的蛋白;Western blot法及ELISA检测证实纯化后的β-hCG/GST融合蛋白具有良好的免疫原性。结论成功获得β-hCG/GST融合蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性,为以β-hCG为靶位的抗肿瘤主动免疫治疗研究奠定了基础。
- 王伟殷小涛李云奇田仁礼吴昊阎瑾琦高江平于继云
- 关键词：Β-HCG原核表达蛋白纯化
- 过表达Sprouty2分子促进HEK293T细胞增殖与存活被引量：1
- 2014年
- 目的构建表达人Sprouty 2(SPRY2)基因的重组表达载体pDC315/hSPRY2,转染人胚肾(HEK)293T细胞表达目的蛋白,初步探讨其对HEK293T细胞增殖与存活的影响。方法构建hSPRY2重组腺病毒表达载体,体外转染HEK293T细胞,以Western blot法检测目的蛋白的表达,以CCK-8法检测SPRY2对HEK293T细胞增殖或去血清条件下细胞存活的影响。结果成功构建重组表达载体pDC315/hSPRY2,在转染的HEK293T细胞中检测到目的蛋白hSPRY2的表达,转染pDC315/hSPRY2组HEK293T细胞的增殖率及存活率均明显高于对照组即转染pDC315/EGFP组(P<0.05)。结论成功构建了hSPRY2重组表达载体,过表达hSPRY2可促进HEK293T细胞的增殖与存活。
- 朱静潆杜芝燕王芳于继云田仁礼殷小涛张巍
- 关键词：过表达增殖存活
- 人survivin蛋白的原核表达、纯化及抗原活性鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的构建人肿瘤抗原survivin的原核表达载体,优化在大肠杆菌中的表达条件,并对survivin/His融合蛋白进行纯化和抗原活性鉴定。方法设计针对survivin基因序列的特异引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增人survivin全长基因序列(538 bp)克隆至原核表达载体pET28a(+),构建重组表达载体pET28a-survivin,并将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达survivin/His融合蛋白,并采用Ni亲和层析凝胶纯化重组蛋白。纯化后的重组蛋白经Western blot法、ELISA鉴定其抗原活性。结果重组表达载体经BamHⅠ和HindⅢ鉴定正确;IPTG诱导后经SDS-PAGE分析表明获得了相对分子质量(M r)24 000大小的重组蛋白;纯化后的蛋白纯度达到90%。Western blot法和ELISA检测证实纯化的survivin蛋白能够与特异性抗体发生反应,表明其具有良好的抗原活性。结论成功构建了原核表达载体pET28a-survivin,利用大肠杆菌表达系统实现了融合蛋白的可溶性表达并进行纯化,纯化后survivin蛋白经鉴定具备较高的抗原活性。
- 殷小涛王伟田仁礼徐元基阎瑾琦张巍高江平于继云
- 关键词：SURVIVIN原核表达蛋白纯化活性检测
