于作
- 作品数：13 被引量：51H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家高技术研究发展计划哈尔滨市科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 一株3型牛腺病毒的分离与鉴定被引量：10
- 2011年
- 本研究于2009年由患急性呼吸道疾病牛的鼻拭子中分离获得一株病毒,经形态特征、血清学试验及PCR鉴定表明,该病毒与牛腺病毒3型(BAV-3)相似。对其E2A基因进行序列测定,并与GenBank中登录的BAV1型、3型、4型及人、绵羊、鼠等其它种属来源的腺病毒E2A基因序列进行比对及系统进化分析,结果显示该分离株与BAV-3的同源性为95.5%。经MEGA4软件分析,分离株与BAV-3验证值为100,表明其为BAV-3,并命名为BAV-3HLJ0955株。对该分离株热敏感试验表明,BAV-3 HLJ0955在56℃ 30min可被完全灭活,属于BAV第一群。这是国内首次分离获得BAV-3的报道。
- 于作朱远茂蔡红高欲燃董秀梅吕闯薛飞
- 犬瘟热病毒血凝蛋白在昆虫细胞中的表达与抗原性分析被引量：1
- 2014年
- 为获得具有天然构象及良好抗原性的犬瘟热病毒(CDV)血凝蛋白(H),本研究以HLJ2-07毒株为模板,利用RTPCR方法扩增出H基因,将其克隆到pFastBacTMHTA载体中,利用大肠杆菌DH10BacTM同源重组构建穿梭质粒reBACmidrH,将重组穿梭质粒转染Sf9昆虫细胞,进行杆状病毒表达。利用Western blotting对获得的重组蛋白进行鉴定及抗原性分析。同时,利用在线网站与软件对CDV H蛋白进行B细胞表位分析预测。结果显示,在杆状病毒系统中表达的H蛋白能与His-tag单克隆抗体及CDV阳性血清发生特异性反应,表明该蛋白成功表达,且具有良好的反应原性;用Swiss-model同源建模软件及B细胞表位预测软件,预测H蛋白可能具有的B细胞表位有5处,分别是175—195、240—250、365—380、480—508及526—555。本研究获得了具有天然构象及良好抗原性的CDV重组H蛋白,可为诊断试剂开发、单克隆抗体制备及表位筛选等工作奠定基础。
- 全传松姜骞于作李博韬李连峰曲连东
- 关键词：犬瘟热病毒B细胞表位
- 牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的多克隆抗体制备及鉴定被引量：6
- 2011年
- 为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)重组E2蛋白的兔源多克隆抗体,本研究利用表达BVDV E2蛋白的重组质粒pET30a-E2转化E.coli BL21(DE3),经诱导表达获得重组E2蛋白。Western blot检测显示纯化蛋白能够与BVDV参考阳性血清反应。以纯化的重组E2蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,病毒中和试验测定其中和效价为1:2048,间接免疫荧光和western blot试验表明其具有良好的反应性和特异性。本研究制备的BVDV重组E2蛋白兔源多克隆抗体可应用于BVDV的检测,同时为进一步建立检测BVDV E2蛋白的ELISA方法奠定基础。
- 高欲燃朱远茂康健史鸿飞李娇任宪刚冯军科于作薛飞
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒E2蛋白多克隆抗体
- Asia 1型口蹄疫病毒VP1基因的表达鉴定及其多抗制备被引量：3
- 2010年
- 本研究旨在表达口蹄疫病毒(FMDV)的VP1全基因并制备特异性的多克隆抗体。利用PCR方法扩增Asia 1 IND 49197株VP1全基因,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,在大肠杆菌BL21中进行表达。SDS-PAGE结果显示表达产物分子量约为31.6ku,以包涵体的形式存在。通过Ni-NTA Purification System纯化后进行western blot和间接ELISA分析,结果显示重组蛋白能够被FMD阳性血清识别,具有良好的反应性。将纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,ELISA测定抗体效价为1∶20480,病毒中和试验测定抗体效价为1∶64。本研究所表达的VP1蛋白可用于开发检测Asia1口蹄疫抗体的诊断试剂,所制备的多克隆抗体为进一步研究VP1的结构、功能以及抗原表位的鉴定提供了条件。
- 朱远茂任宪刚史鸿飞高欲燃于作冯军科相文华薛飞
- 关键词：ASIAVP1基因多克隆抗体
- 牛腺病毒3型中国分离株的鉴定及全基因组序列分析
- 牛腺病毒3型（Bovine adenovirus 3, BAV3），为腺病毒科（Adenoviridae）哺乳动物腺病毒属（Mastadenovirus）的成员，属于牛腺病毒（Bovine adenovirus，BAV）...
- 于作
- 关键词：全基因组测序
- 文献传递
- 牛病毒性腹泻病毒重组E2蛋白多克隆抗体的制备及鉴定
- 为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)重组E2蛋白兔源多克隆抗体,利用已有的表达E2蛋白的重组质粒pET30a-E2转化表达菌BL21(DE3),经培养诱导表达出重组E2蛋白,western blot显示纯化的重组E2蛋白能...
- 高欲燃朱远茂史鸿飞任宪刚冯军科于作薛飞
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒E2蛋白多克隆抗体
- 牛腺病毒2型中国分离株的鉴定及全基因组序列分析
- 牛腺病毒3型(Bovine adenovirus3,BAV3),为腺病毒科(Adenoviridae)哺乳动物腺病毒属(Mastadenovirus)的成员,属于牛腺病毒(Bovine adenovirus,BAV)第一...
- 于作
- 关键词：基因分离全基因组测序
- 文献传递
- 表达兔出血症病毒vp60基因的重组犬2型腺病毒的构建及其免疫效力评价
- 兔出血症(Rabbit hemorrhagic disease，RHD)是由兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic diseasevirus，RHDV)引起成年兔的一种急性、致死性、接触性传染病，以呼吸系统出...
- 于作
- 关键词：兔出血症病毒犬2型腺病毒VP60基因免疫效力
- 套式RT-PCR检测牛呼吸道合胞体病毒的研究被引量：12
- 2010年
- 为了检测牛呼吸道合胞体病毒(BRSV),根据已发表的融合蛋白(F)基因序列,设计了套式RT-PCR引物,初步建立了BRSV的套式RT-PCR检测方法。对138份牛鼻腔棉拭子进行了检测,结果检测到了BRSV阳性样品54份,总的阳性检出率为39.1%。对大部分BRSV阳性样品的F基因扩增产物进行了序列测定与分析。用该套式RT-PCR对牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛病毒性腹泻病毒等进行了检测,结果无交叉反应,表明该检测方法具有良好的特异性。本研究首次用套式RT-PCR技术证实了我国部分省的牛群中存在BRSV感染。
- 史鸿飞朱远茂高欲燃任宪刚冯军科于作薛飞
- 关键词：牛呼吸道合胞体病毒套式RT-PCR
- 犬瘟热病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：10
- 2014年
- 为建立快速检测犬瘟热病毒的诊断方法,根据GenBank中犬瘟热病毒核衣壳蛋白(NP)基因的保守序列设计1对特异性引物和1条特异性探针,通过对反应体系和反应条件的优化,建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,该方法对犬瘟热病毒最低检出量为80copies/μL,是常规RT-PCR的100倍;与其他犬类病毒不发生交叉反应;组内、组间变异系数均小于5%。对收集的67份临床样品进行检测,阳性检出率为64.2%,而常规RT-PCR的阳性检出率为44.8%。研究结果表明,建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR具有良好的敏感性、特异性和稳定性,为犬瘟热的早期诊断提供了技术手段。
- 全传松李博韬姜骞李连峰于作曲连东
- 关键词：犬瘟热病毒TAQMAN实时荧光定量RT-PCR
