苏州大学医学部基础医学与生物科学学院细胞与分子生物学教研室
- 作品数：13 被引量：31H指数：4
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- 脐血CD34+造血干/祖细胞在再生丝素膜上向内皮细胞分化的研究
- 目的:以人脐血CD34+造血干/祖细胞为种子细胞,探讨其体外分离、纯化、诱导扩增和分化为内皮细胞的可行性,以及丝素材料对其生长、粘附、分化等情况的影响。方法:采集新鲜脐血,磁珠分选方法（MACS）分离出CD34+单个核细...
- 陈瑶田丽娜张晓峰盛伟华韩亚丽刘铁连杨吉成缪竞诚
- 关键词：脐血诱导分化内皮细胞丝素
- 文献传递
- Ad-VEGF165-Ang-1转基因细胞修饰的再生丝素膜诱导血管形成效应及分子机制研究
- 目的:构建VEGF165及Ang-1双基因共表达腺病毒载体并研究该转基因细胞修饰的再生丝素膜诱导血管形成活性及其分子机制。方法:首先在科室已构建的IRES和双启动子介导的腺病毒空载体间分别插入Ang-1和VEGF165基...
- 陈瑶田丽娜张晓峰刘铁连韩亚丽盛伟华杨吉成缪竞诚
- 关键词：血管生成素-1腺病毒转基因
- IL-24基因修饰增强CIK细胞对HL-60细胞的细胞毒作用被引量：4
- 2009年
- 目的:研究IL-24基因修饰的CIK细胞与同源树突状细胞共培养后对白血病细胞的杀伤作用及其机制。方法:从健康人外周血单个核细胞中常规诱导DC和CIK细胞,电穿孔法将IL-24基因导入CIK细胞中(获得细胞为CIK-IL24),RT-PCR和ELISA法检测CIK细胞中IL-24基因的表达,FCM和ELISA法检测转基因前后CIK表型及分泌细胞因子能力的变化,将CIK细胞和同源DC共培养,FCM法检测共培养的DC-CIK细胞对HL-60细胞细胞毒活性的变化。结果:通过电穿孔法成功将IL-24基因导入CIK细胞,与对照组相比,转IL-24基因后CIK细胞中CD3+、CD3+CD56+细胞的比例无明显改变,CD4+CD25+细胞比例显著下降。IL-24可上调CD3+CD56+细胞表面粘附分子CD54、CXCR4的表达,转染IL-24基因后CIK分泌TNF-α和IFN-γ的能力显著增强,与DC共同作用HL-60细胞时转染IL-24基因后的CIK细胞细胞毒活性明显增强。结论:通过IL-24基因修饰,明显增强了CIK细胞对HL-60细胞的杀伤能力,其机制与IL-24促进CIK分泌TNF-αI、FN-γ,上调CIK细胞表面粘附分子的表达,减少CD4+CD25+调节性T细胞比例等密切相关。
- 夏卫郁心王浦南徐洪卫陈宇奚华新杨吉成缪竞诚
- 关键词：人IL-24CIK细胞HL-60细胞细胞毒
- Ad-LIF-OSM双基因转染饲养细胞对脐血造血细胞体外增殖和分化的影响被引量：1
- 2011年
- 目的构建表达人白血病抑制因子（LIF）和抑瘤素M（OSM）双基因的WI-38人胚肺成纤维细胞，并以此细胞作为饲养层细胞观察其对CD34造血干／祖细胞体外增殖和分化的影响。方法以双启动子转移载体pAdTrack-CMV-LIF-polyA＋promoter。为基础，将OSM基因片段酶切后插入，构建出转移质粒pAdTrack-CMV-LIF-polyA＋promoter。OSM。将构建正确的转移质粒与腺病毒骨架质粒共转化，获得重组腺病毒载体pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-LIF-polyA＋promoter。OSM，通过包装，收获重组腺病毒（Ad-LIF-OSM）。将重组腺病毒感染饲养层细胞，经RT．PCR、ELISA法检测外源基因在细胞中的表达；体外与CD34造血干／祖细胞共培养后，通过Transwell法和细胞计数检测，比较各实验组干／祖细胞体外扩增与分化情况。结果测序结果显示重组载体中的LIF和OSM基因序列正确；转基因饲养层细胞中能检测到外源LIF和OSM基因的转录和表达；外源LIF和OSM基因在造血干／祖细胞体外培养中能够发挥作用。结论成功构建携带人LIF和OSM的双基因重组腺病毒载体（Ad-LIF-OSM），Ad-LIF．OSM在造血干／祖细胞体外培养的过程中能够有效地扩增CD34造血干／祖细胞，并延缓其分化。
- 包婉蓉郁心盛伟华张凤娟王家融杨吉成缪竞诚
- 关键词：白血病抑制因子抑瘤素M
- IRES/polyA-promoter介导的Ang-1与VEGF165双基因表达效率的对比分析被引量：2
- 2010年
- 目的：构建IRES及polyA-promoter介导人血管生成素-1（Angiogenin-1,Ang-1）和人血管内皮生长因子165（vascular endothelial growth factor165,VEGF165）双基因共表达的腺病毒载体,比较IRES与polyA-promoter不同表达模式及其对位于二者前后基因的表达效率和诱导兔角膜新生血管的形成功能,为今后构建双基因或多基因高效共表达载体提供实验依据。方法：以pAdTrack-CMV-Ang-1-IRES-VEGF165质粒为模板,PCR扩增人VEGF165及Ang-1基因片段,分别将其亚克隆至改建的pAdTrack-CMV-PolyA-promoter及pAdTrack-CMV-IRES转移质粒中,构建pTrack-CMV-Ang-1-polyA-promoter-VEGF165、pTrack-CMV-VEGF165-polyA-promoter-Ang-1、pTrack-CMV-VEGF165-IRES-Ang-1基因重组转移质粒,再与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中同源重组,然后经PacI线性化后转染QBI-293A人胚肾成纤维细胞（简称293A细胞）,收获腺病毒重组病毒子Ad-Ang-1-polyA-promoter-VEGF165及Ad-VEGF165-polyA-promoter-Ang-1,Ad-VEGF165-IRES-Ang-1,RT-PCR检测Ang-1和VEGF165在QBI-293A细胞中的转录,ELISA法分别检测不同腺病毒载体目的基因的表达量,比较分析Ang-1与VEGF165基因在IRES和polyA-promoter介导的不同腺病毒表达载体中的表达能力,及在同一腺病毒表达载体中前后不同位置的表达效率。并进一步于兔角膜缘注射Ad-Ang-1-polyA-promoter-VEGF165,Ad-VEGF165-polyA-promoter-Ang-1,Ad-VEGF165-IRES-Ang-1,Ad-Ang-1-IRES-VEGF165,检测角膜新生血管的面积,并比较其诱导血管形成能力的差异。结果：测序显示Ang-1和VEGF165序列正确,不同重组腺病毒载体均获得成功包装,病毒效价可达2~5×1010pfu/m l,RT-PCR检测Ang-1和VEGF165均能有效转录,ELISA法检测结果表明Ang-1、VEGF165基因不仅均能在细胞中有效表达,而且IRES介导的Ang-1及VEGF165基因,无论在IRES上游或下游,其表达量均低于polyA-promoter相同位置的Ang-1及VEGF165基因表达量,大约降低60%~70%左右,同时Ang-1/VEGF165在同一载体上、下�
- 陈瑶缪竞诚韩亚丽盛伟华包婉蓉田丽娜张凤娟吕海涛杨吉成
- 关键词：血管生成素-1血管内皮生长因子IRES
- 脐血CD34+造血干/祖细胞在再生丝素膜上向内皮细胞分化的研究
- 目的:以人脐血CD34造血干/祖细胞为种子细胞,探讨其体外分离、纯化、诱导扩增和分化为内皮细胞的可行性,以及丝素材料对其生长、粘附、分化等情况的影响。方法:采集新鲜脐血,磁珠分选方法(MACS)分离出CD34单个核细胞,...
- 陈瑶田丽娜张晓峰盛伟华韩亚丽刘铁连杨吉成缪竞诚
- 关键词：脐血诱导分化内皮细胞丝素
- 腺病毒介导的ING4基因对人肺腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其分子机制被引量：4
- 2014年
- 背景与目的肿瘤生长抑制因子4(inhibitor of growth 4,ING4)基因是一种重要的肿瘤抑制因子,研究发现ING4基因对多种肿瘤细胞具有抑癌作用。本研究旨在探讨ING4基因对人肺腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其潜在的作用机制。方法采用SPC-A1细胞株建立肺腺癌裸鼠移植瘤模型,15只荷瘤裸鼠随机等分为PBS组、腺病毒组(Ad-GFP组)、腺病毒介导的ING4组(Ad-ING4组),上述各组进行局部干预用药,动态测量肿瘤体积,治疗结束后摘取瘤体称重并计算瘤重抑瘤率;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测瘤体内细胞凋亡情况,免疫组织化学SP法检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、环氧化酶-2(COX-2)、Fas与FasL的表达。结果 Ad-ING4组的肿瘤体积、瘤重均呈现明显下降,与Ad-GFP组抑瘤率(1.31%±0.31%)比较,差异有统计学意义(P<0.05),其抑瘤率为(33.17%±5.24%);Ad-ING4组的凋亡指数为(69.23%±6.53%),与PBS组(17.04%±1.10%)、Ad-GFP组(18.81%±1.93%)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。SP法检测结果显示,Ad-ING4可明显上调Caspase-3、Fas与FasL表达,下调COX-2表达。结论 ING4具有抑制肺腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用,该作用机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关。
- 黄锦宏杨吉成凌春华赵大国谢宇锋由振华
- 关键词：生长抑制因子4肺肿瘤移植瘤
- 腺病毒介导IL-24-E1A双基因载体的构建及其体外抑制SMMC-7721肝癌细胞生长作用初探被引量：3
- 2009年
- 构建IL-24和E1A双基因腺病毒载体,获得Ad-IL-24-E1A重组腺病毒子,分析其体外抑瘤作用。PCR及BglⅡ和SalⅠ酶切获得IL-24,与空载体构建成pAdTrack-IL-24-IRES。XhoI和EcoRV酶切获得E1A片段,与pAdTrack-IL-24-IRES连接后成功构建pAdTrack-IL-24-IRES-E1A,同源重组、包装和扩增获得Ad-IL-24-E1A重组病毒子。用50MOI重组腺病毒感染SMMC-7721肝癌细胞,MTT法测定Ad-IL-24-E1A的细胞生长抑制作用;流式细胞仪分析细胞凋亡情况。本研究成功获得Ad-IL-24-E1A重组病毒子。与其他组相比,Ad-IL-24-E1A明显抑制肿瘤细胞生长,感染48h后凋亡率达52%,而抑制正常细胞作用不明显。研究提示Ad-IL-24-E1A双基因重组载体明显抑制SMMC-7721肝癌细胞生长。
- 汪小华缪竞诚谢宇锋盛伟华单云波杨吉成
- 关键词：SMMC-7721肝癌细胞抑瘤
- 腺病毒载体介导IL-24基因对肺癌细胞的化疗增敏效应被引量：4
- 2012年
- 目的研究携带人IL-24基因腺病毒载体(Ad-IL-24)联用顺铂(DDP)对人非小细胞肺癌NCI-H460细胞生长和凋亡的影响。方法取对数生长期的NCI-H460细胞,MTT比色法检测Ad-IL-24联合DDP对细胞生长的影响,流式细胞仪分析细胞周期及检测细胞凋亡率。结果 Ad-IL-24联合DDP对NCI-H460细胞的生长抑制作用和诱导凋亡效应均明显优于单用Ad-IL-24和单用化疗药物DDP,且G2/M期细胞比例显著增加(P<0.05或<0.01)。结论 Ad-IL-24能提高NCI-H460肺癌细胞对化疗药物DDP的敏感性。
- 李畅赵军李印梁光辉盛伟华杨吉成
- 关键词：腺病毒肺癌基因治疗顺铂
- Ad-VEGF165-Ang-1转基因细胞修饰的再生丝素膜诱导血管形成效应及分子机制研究
- 目的:构建VEGF165及Ang-1双基因共表达腺病毒载体并研究该转基因细胞修饰的再生丝素膜诱导血管形成活性及其分子机制。方法:首先在科室已构建的IRES和双启动子介导的腺病毒空载体间分别插入Ang-1和VEGF165基...
- 陈瑶田丽娜张晓峰刘铁连韩亚丽盛伟华杨吉成缪竞诚
- 关键词：血管生成素-1腺病毒转基因
- 文献传递
