中央高校基本科研业务费专项资金(JUDCF10070)
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
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- 相关机构：江南大学皖西学院更多>>
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- 相关领域：生物学轻工技术与工程更多>>
- T26P和A30P位点突变对Thermobifida fusca葡萄糖异构酶热稳定性及活性的影响被引量：2
- 2013年
- 通过定点突变技术构建了嗜热菌Thermobifida fusca葡萄糖异构酶(TFGI)的3个突变体:TFGI/T26P,TFGI/A30P和TFGI/T26P/A30P。结果表明突变体TFGI/A30P的热稳定性得到提高,70℃下半衰期从14.9h提高到22.3h,且最适温度不变,最适温度下的比酶活保持不变。而突变体TFGI/T26P和TFGI/T26P/A30P在70℃下半衰期都降到8.1h,最适温度和最适温度下的比酶活也都显著降低。TFGI及其单突变体的三维结构模型叠加分析结果表明:突变体A30P没有产生其它分子间作用力,TFGI的"Phe27环"的基本结构没有改变,因脯氨酸残基降低了蛋白解折叠的熵值,所以其热稳定性提高而比活力不变。
- 邓辉陈晟陈坚吴敬
- 关键词：定点突变热稳定性嗜热菌葡萄糖异构酶
- 葡萄糖异构酶的结构特征及其工业(高产)用酶发掘被引量：3
- 2016年
- 葡萄糖异构酶(glucose isomerase,GIase;EC 5.3.1.18)是利用淀粉生产果葡糖浆的关键用酶。筛选和构建适合大规模工业生产的GIase一直是研究的热点。本文首先综述葡萄异构酶的基本性质与序列结构和功能特性,在分析比对高生产性能GIase的序列特征和空间结构特征的基础上,发现位于该组GIase的"催化口袋"上存在12个特有保守氨基酸残基位点,且有5个位点的残基含两性(亲水和疏水)的环状结构。由此提出了"高性能葡萄异构酶存在特有保守位点"的推断假设,并在结合自身实验结果和他人的研究,对基于特有保守位点发掘高生产性能GIase的可行性进行了进一步验证和探讨。该研究思路对高性能商业化GIase的发掘及对其它GIase的性能改造具有重要的参考价值。
- 邓辉陈存武韦传宝
- 关键词：葡萄糖异构酶结构特征
- 产葡萄糖异构酶细胞的固定化被引量：5
- 2013年
- 采用壳聚糖絮凝和戊二醛交联的方法,对表达生产Thermobifida fusca葡萄糖异构酶(GIase)的重组大肠杆菌细胞进行固定化工艺研究,以期获得高性能和低成本的固定化产酶细胞方法。考察影响细胞絮凝和交联的各种因素,并对固定化酶制剂的理化性质、动力学常数进行测定。结果表明:最佳的固定化条件为在高密度发酵液中添加0.6%硅藻土和5mmol/L Mg2+,经60℃热处理30min后,在壳聚糖终质量分数0.1‰、pH5.5、充分搅拌条件下絮凝,酶活回收率达98%;絮凝产物在戊二醛体积分数0.25%、pH6.5、轻微搅拌条件下交联3h,以未交联的样品作参照(100%),交联样品的酶活保留率达80%。相对于游离GIase,此条件下制备的固定化GIase的最适温度仍为80℃、最适pH值从10降低至9;在工业生产应用条件下,固定化GIase的初始酶活力达到356U/g,半衰期为61d,能够满足高果糖浆工业的生产要求。
- 邓辉陈晟陈坚吴敬
- 关键词：葡萄糖异构酶固定化
- Thermobifida fusca葡萄糖异构酶在枯草杆菌中的表达被引量：2
- 2015年
- 为研究葡萄糖异构酶(GIase)在枯草杆菌中的表达效果,通过PCR扩增Thermobifida fusca GIase基因xyl A,分别克隆该基因序列到不同诱导表达方式的穿梭载体:p HCMC04、p MA09、p AL12,并转化枯草杆菌WB600。结果表明,含重组质粒p MA09-xyl A的枯草杆菌产酶最优,达到1.8 U/m L。对该重组枯草杆菌发酵产酶条件进行优化,以TB为发酵培养基,初始p H 7.0,温度为30℃时,摇瓶培养24 h后,GIase的产量达到5.6 U/m L。
- 邓辉陈存武孙传伯韦传宝
- 关键词：枯草芽孢杆菌发酵优化
