王勇
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
- 供职机构：石河子大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 布鲁氏菌omp25基因真核表达载体的构建与分析被引量：5
- 2010年
- 构建表达流产布鲁氏菌外膜蛋白基因omp25的酿酒酵母表达菌并进行验证。对流产布鲁氏菌疫苗株S19外膜蛋白基因omp25设计特异引物进行PCR扩增,连接到pGM-T载体上,获得pGM-T-omp25,进行PCR扩增、酶切、测序鉴定。将质粒pGM-T-omp25与pGBKT7载体进行EcoRⅠ/SalⅠ双酶切,回收DNA片段,并进行连接,构建pGBKT7-omp25后,转化酿酒酵母菌Y187,并进行PCR鉴定、自激活实验和毒性检测。克隆了流产布鲁氏菌外膜蛋白基因omp25,PCR、酶切、测序表明成功构建了pGBKT7-omp25真核表达载体,获得的转化子酵母Y187菌株无自激活活性,无毒性。成功构建了表达流产布鲁氏菌外膜蛋白基因omp25的酿酒酵母表达菌,为揭示流产布鲁氏菌感染与母畜流产间的分子机制奠定基础。
- 王勇陈创夫张辉郭乾任艳蒋松
- 关键词：流产布鲁氏菌真核表达
- 牛种布鲁菌virB4基因酵母表达载体的构建被引量：1
- 2010年
- 根据GenBank中的牛种布鲁菌RB51株virB4基因保守序列设计引物，扩增virB4基因，将其克隆到pMD18-T载体上，鉴定正确后与酵母表达载体pGBKT7进行连接，转化酿酒酵母菌Y187后进行PCR、酶切鉴定，阳性克隆测序分析后转化酿酒酵母菌Y187感受态细胞进行自激活和毒性检测。结果表明：克隆的基因包含了virB4完整编码区的2496bp核苷酸序列，成功地构建了包含pGBKT7-virB4诱饵质粒的酿酒酵母菌Y187表达菌。
- 郭乾陈创夫张辉王勇任艳
- 牛胚胎滋养层巨细胞的体外分离培养
- 2009年
- 建立牛胚胎滋养层细胞的体外分离、培养方法。取怀孕牛45～60天的完整子宫,无菌条件下收集胚胎子叶,采用胶原酶消化方法分离细胞。将细胞随机分为两组,一组用差异贴壁法纯化滋养层细胞,另一组未纯化则用含15%胎牛血清和滋养层细胞生长添加剂(trophoblast growth supplement,TGS)的DMEM培养基培养细胞。采用台盼蓝和Hoechst33342细胞染色液对细胞活力及形态学进行分析,采用免疫细胞化学法进行细胞纯度鉴定。结果显示,本实验分离的细胞经台盼蓝染色后记录细胞存活率大于90%,核染可见典型双核特征。纯化组细胞经差异贴壁法纯化后双核滋养层巨细胞(binucleate trophoblast giant cells,TGC)纯度可达95%,未纯化组细胞中TGC只占45%～50%左右。抗细胞角蛋白抗体检测呈阳性,抗波形蛋白抗体检测呈阴性。细胞经过4次传代后,可以存活60天。本试验成功建立了一种快速、简便、能够培养高纯度牛胚胎滋养层细胞的方法,为进一步研究滋养层细胞与相关病原侵入机制打下了基础。
- 任艳陈创夫乔军王勇郭乾张辉王鹏雁
- 关键词：细胞培养
