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用于肠道病毒71型灭活疫苗纯度分析的毛细管区带电泳法研究被引量：3: 2014年; 目的：建立毛细管区带电泳（capillary zone electrophoresis,CZE）方法,用于肠道病毒71型（Enterovirus 71,EV71）灭活疫苗纯度检测及分析。方法：以样品检测峰高度、分离度、信噪比为判断标准,对不同运行缓冲液、样品缓冲液、毛细管长度、上样时间等进行选择优化,确定毛细管区带电泳条件,同时采用HPLC法分离及免疫共沉淀法对各样品检测峰进行鉴定。利用建立的CZE方法对7批EV71灭活疫苗原液进行检测,采用面积归一法,计算疫苗原液纯度。结果：当运行缓冲液为pH 8.2硼酸缓冲体系、盐浓度为150 mmol·L^-1、SDS浓度为10 mmol·L^-1时,上样时间为100 s、毛细管有效长度为50 cm时,主检测峰高度最高、信噪比最优和分离度大于1.5。以含SDS 10 mmol·L^-1的150 mmol·L^-1pH 8.2硼酸盐缓冲液为运行缓冲液,5 mmol·L^-1硼酸盐缓冲液为上样缓冲液,以长50 cm、内径为50μm的无涂层石英毛细管作为色谱分离柱,对EV71灭活疫苗原液纯度进行检测,可见2个样品检测峰,经HPLC法及免疫共沉淀法鉴定,样品检测峰1为EV71病毒颗粒,迁移时间6.98 min、样品检测峰2为杂质,迁移时间8.42 min;连续进样6次,2个样品检测峰的峰面积、峰起时间、峰止时间和保留时间的相对标准偏差（relative standard deviation,RSD）均〈2.0%。应用该方法对7批EV71灭活疫苗原液纯度进行检测,为95.3%-99.4%,均大于95%。结论：初步建立了可用于EV71灭活疫苗原液纯度测定的毛细管区带电泳方法,为该疫苗的质量研究、工艺过程控制及稳定性研究奠定了基础。; 吴蕴怡郭会杰马淑花陈蕾温智恒鲁卫卫李秀玲; 关键词：肠道病毒71型灭活疫苗毛细管区带电泳纯度测定

肠道病毒71型抗原含量检测方法的建立及初步验证: 目的：建立肠道病毒71型(EV71)抗原含量检测方法并进行初步验证，用于疫苗研制及生产过程中抗原含量的检测。方法：以抗EV71单克隆抗体为包被抗体，酶标抗EV71多克隆抗体为检测抗体，建立双抗体夹心ELISA...; 徐静崔文禹李树香刘敬王欣怡陈蕾沈心亮; 关键词：肠道病毒病毒感染酶联免疫吸附; 文献传递

TaqMan MGB探针实时定量PCR检测Vero细胞残余DNA方法的适用性验证及应用: 2014年; 目的对Taq Man MGB探针实时定量PCR检测Vero细胞残余DNA的方法进行适用性验证及应用。方法对Taq Man MGB探针实时定量PCR检测Vero细胞残余DNA的方法进行特异性、灵敏度、精密性、准确性验证,并应用该方法检测3批次脊髓灰质炎病毒浓缩液、纯化液和原液中Vero细胞残余DNA含量,计算Vero细胞残余DNA去除率。结果 Taq Man MGB探针实时定量PCR能够特异性扩增Vero细胞基因组DNA长串连重复序列;DNA浓度在10-1~10-6 ng/μl范围内标准曲线线性良好,相关系数为0.996,扩增效率为93.54%;检测灵敏度为10-6 ng/μl,高于斑点杂交法;检测高（10-2 ng/μl）、中（10-4 ng/μl）、低（10-6 ng/μl）浓度阳性对照DNA模板的试验内变异系数（CV）为0.145%~3.110%,试验间CV为0.624%~2.359%;检测不同浓度阳性对照DNA的回收率在101.5%~109.4%之间,均在定量方法可接受的回收率范围内;在斑点杂交检测灵敏度范围内,同一样品采用Taq Man MGB探针实时定量PCR法与斑点杂交法半定量检测的结果吻合。3批次脊髓灰质炎病毒浓缩液纯化后可有效去除Vero细胞残余DNA,总去除率约为100%。结论 Taq Man探针实时定量PCR法特异性、精密性、准确性良好,灵敏度高,可作为斑点杂交法的替代方法,用于实验室内部的质量控制。; 刘宇王潇潇宋冬梅温智恒鲁卫卫陈蕾李秀玲; 关键词：TAQ 斑点杂交 VERO细胞残余DNA

肠道病毒71型灭活疫苗的小鼠细胞免疫效果被引量：5: 2014年; 目的评价肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗诱导小鼠的细胞免疫效果。方法分别以不同剂量(1、2.5、5、10μg/ml,均含铝佐剂1 mg/ml)、不同剂型(含铝佐剂1 mg/ml或不含铝佐剂)、不同免疫剂次(单次免疫或加强免疫)EV71灭活疫苗经腹腔免疫小鼠,0.5 ml/只,均设铝佐剂对照组(仅注射铝佐剂1 mg/ml)。采用经典小鼠树突状细胞(dendritic cell,DC)培养方法制备正常小鼠DC,瑞氏染色法检测细胞形态,流式细胞术分析其表型及纯度;免疫磁珠分选法(magnetic activated cell sorting,MACS)分离小鼠脾脏CD4+、CD8+T淋巴细胞,流式细胞术检测细胞纯度。ELISPOT法检测各组免疫小鼠CD4+、CD8+T淋巴细胞分泌IL-2、IL-4、IFNγ的水平;细胞因子试剂盒检测小鼠淋巴细胞培养上清及小鼠血清中细胞因子的水平。结果 DC形态不规则,表面树枝状突起形态不同,细胞核较大且不规则;DC纯度为(81.39±9.24)%,可高水平表达MHⅡ(I-A/I-E)类分子,中度表达CD86和CD40。CD4+、CD8+T细胞纯度分别为95.27%和94.08%。随着疫苗免疫剂量的增加,CD4+T细胞分泌IL-2、IL-4、IFNγ及CD8+T细胞分泌IFNγ的SFC显著增加,5μg/ml疫苗组达最大值,且明显高于其他组(P均<0.05);5μg/ml疫苗组淋巴细胞培养上清中IFNγ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-13、IL-5、TNF-α含量明显高于其他组(P<0.05);1、2.5、5μg/ml疫苗组血清中IL-10含量明显高于铝佐剂对照组(P<0.05),1μg/ml疫苗组明显低于2.5及5μg/ml疫苗组(P<0.05)。含铝佐剂疫苗组CD4+T细胞分泌IL-2、IL-4、IFNγ及CD8+T细胞分泌IFNγ的SFC、淋巴细胞培养上清中IL-2、IFNγ、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13、TNF-α水平及血清中IL-10含量均明显高于无铝佐剂疫苗组(P均<0.05)。加强免疫组CD4+T细胞分泌IL-2、IL-4、IFNγ及CD8+T细胞分泌IFNγ的SFC、淋巴细胞培养上清中IL-2、IFNγ、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13、TNF-α水平、血清中IL-10含量均明显高于单次免疫组(P; 鲁卫卫吴蕴怡郝春生宋冬梅马淑花刘宇陈蕾李秀玲; 关键词：肠道病毒71型灭活疫苗细胞免疫

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陈蕾

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