孔宁
- 作品数：25 被引量：13H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科技兴农重点攻关项目国家生猪现代产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猪流行性腹泻病毒间接ELISA检测方法的建立被引量：4
- 2016年
- 本研究获得5个猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S1基因截短基因,原核表达后制备多克隆抗体。酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、Western blot和间接免疫荧光检测(indirect immunofluorescence assay,IFA)显示,仅有SE蛋白诱导的多克隆抗体具有免疫活性。因此以SE蛋白为抗原建立间接ELISA抗体检测方法,优化各反应参数并确定临界值为0.155。经特异性和符合性分析,该ELISA检测方法具有PEDV特异性,符合率为93.7%。批内、批间重复率变异系数均小于10%,表明建立的iELISA方法重复性良好。抗S蛋白的ELISA检测方法的建立为PEDV血清学抗体检测和疫苗评估奠定了基础。
- 孟琼孔宁单同领吴永光左叶雯童武郑浩李国新于海童光志徐永杰
- 关键词：间接ELISA猪流行性腹泻病毒
- 猪BST-2全基因克隆、真核表达载体构建及组织表达谱分析被引量：1
- 2017年
- 为研究猪BST-2基因的生物学功能,用特异性的引物扩增猪BST-2基因,并利用生物信息学软件对猪BST-2基因及氨基酸进行分子特性分析,同时进行了猪BST-2蛋白的真核表达及组织表达谱分析。结果表明:猪BST-2基因全长851bp,其中5′-UTR为23bp,3′-UTR为294bp,CDS区为534bp,编码177个氨基酸,猪源BST-2蛋白氨基酸序列与大猩猩、仓鼠、家鼠、驴、猫、牛、猕猴、绵羊、人BST-2蛋白氨基酸序列同源性分别为46.1%,41.7%,39.5%,35.4%,42.0%,40.5%,44.4%,38.7%,46.8%。含有2个跨膜结构(27~49aa和154~176aa),2个潜在的糖基化位点,14个潜在的磷酸化位点,包含磷酸激酶ATM、CKⅡ、PKA、PKC的结合位点。构建真核质粒并转染发现猪BST-2蛋白能够在Vero细胞内正确表达。半定量PCR检测发现BST-2基因在所有组织中均有表达,尤其是在免疫组织及器官(淋巴结、胸腺、扁桃体、脾)、大肠、小肠中的表达量较高。本试验为今后进一步分析验证猪BST-2蛋白的抗病毒机制奠定了基础。
- 孔宁吴永光孟琼王忠泽童武郑浩李国新单同领周恩民童光志
- 关键词：组织表达谱
- 猪源IRAV的克隆、表达及单克隆抗体的制备
- 2022年
- 干扰素调节的抗病毒基因(IRAV)是近年来被发现的一种具有抗病毒活性的新型干扰素刺激基因,其对登革热病毒的增殖具有良好的抑制作用,但目前鲜有猪源IRAV基因的研究。本研究,从PK-15细胞中克隆了IRAV全长的cDNA。猪源IRAV cDNA全长为1241 bp,其中包含858 bp的开放阅读框,编码一个大小为285个氨基酸的多肽,定位于细胞质。将猪源IRAV蛋白在BL21(DE3)中诱导表达,经纯化后免疫雌性BALB/c小鼠,最终获得5株分泌猪源IRAV单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞,分别命名为2B10、2G12、2H1、5A8和2C5。将获得的分泌性抗IRAV单克隆抗体经Western blot和间接免疫荧光试验分析后,确定该抗体可以与PK-15细胞中过表达的猪源IRAV发生特异性反应。本研究成功制备针对猪源IRAV的单克隆抗体,为后续深入研究猪源IRAV的功能奠定了基础。
- 王桦焦亚娟孔宁孙大格董苏洁陈晓勇翟焕杰童武童武于海郑浩童光志于海
- 关键词：系统发育分析单克隆抗体
- 抗猪PABPC1蛋白单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2022年
- 细胞质聚腺苷酸结合蛋白1(PABPC1)是一种mRNA poly A结合蛋白,在维持mRNA稳定和蛋白翻译方面起着重要作用。本研究中将猪源PABPC1基因克隆并插入原核表达载体pCold-Ⅰ中,构建重组表达质粒pCold-pPABPC1。将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并经过IPTG诱导表达重组猪PABPC1蛋白。然后,用纯化的rpPABPC1蛋白免疫BALB/c小鼠以制备PABPC1的单克隆抗体。Western blot结果表明,PABPC1单克隆抗体与PK1细胞和HEK293T细胞中的PABPC1蛋白发生了特异性反应。猪PABPC1特异性单克隆抗体为进一步研究PABPC1的功能提供了有价值的工具。
- 焦亚娟王桦孔宁孙大格董苏洁陈晓勇翟焕杰童武童武于海郑浩童光志于海
- 关键词：克隆单克隆抗体
- 猪流行性腹泻病毒抗体间接ELISA检测方法建立
- 本研究获得5个猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S1基因截短基因,原核表达后制备多克隆抗体。ELISA、Western Blot和IFA试验结果表明仅有SE蛋白诱...
- 孟琼孔宁单同领吴永光左叶雯童武郑浩李国新于海童光志徐永杰
- 关键词：间接ELISAPEDV
- 文献传递
- 一株串联表达非洲猪瘟病毒P30、P54基因重组伪狂犬病毒基因工程疫苗及其应用
- 本发明提供一株串联表达非洲猪瘟病毒P30、P54基因重组伪狂犬病毒基因工程疫苗及其应用，本研究以PRV JS‑2012‑ΔgI/gE株为基础，利用同源重组的方法，将现今国内流行的非洲猪瘟病毒的主要抗原蛋白(P30、P54...
- 童武周艳君童光志包玮玲高飞郑浩李国新于海单同领姜一峰虞凌雪刘长龙李丽薇孔宁
- 一株表达非洲猪瘟病毒P54基因重组伪狂犬病毒基因工程疫苗及其应用
- 本发明提供一株表达非洲猪瘟病毒P54基因重组伪狂犬病毒基因工程疫苗及其应用，本研究以PRV JS‑2012‑△gI/gE株为基础，利用同源重组的方法，将现今国内流行的非洲猪瘟病毒的主要抗原蛋白(P54蛋白)的基因序列，插...
- 童武周艳君童光志包玮玲高飞郑浩李国新于海单同领姜一峰虞凌雪刘长龙李丽薇孔宁
- 表达猪源GM-CSF重组PRRSV疫苗对同源高致病性毒株的免疫保护效力评价
- 2024年
- 为研究表达猪源粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在动物体内的免疫调节特性及对其的保护效力评价,本研究将15头30日龄仔猪随机分成4组,空白对照组(DMEM)4头、疫苗对照组(HuN4-F112株)4头、疫苗组(rPRRSV-GM-CSF株)3头和攻毒对照组(DMEM^(+)HuN4株)4头。疫苗对照组肌注免疫HuN4-F112株10^(5) TCID_(50)/头、疫苗组肌注免疫rPRRSV-GM-CSF株10^(5) TCID_(50)/头,实验空白组和攻毒对照组肌注DMEM 2 mL/头,免疫后28 d,疫苗组、疫苗对照组和攻毒对照组肌注HuN4株(10_(5) TCID_(50)/头)。攻毒后的试验结果表明,免疫rPRRSV-GM-CSF重组病毒组和疫苗株HuN4-F112组获得完全保护,阴性对照组全部死亡;通过IDEXX试剂盒检测仔猪血清中PRRSV抗体水平可知,在免疫14 d后,疫苗组抗体水平显著高于疫苗对照组(P<0.05);由流式细胞术分析体内免疫细胞亚群比例可知,疫苗组同疫苗对照组相比,疫苗组的重组疫苗株能够引起免疫记忆细胞亚群CD4^(+)CD8^(+)T在免疫后28 d显著升高,以及引发攻毒后其抗原递呈细胞显著增多,进而促进CD4-CD8^(+)T的增殖以发挥抗病毒免疫应答。本研究筛选出了一株具有改善HuN4-F112弱毒疫苗株免疫效果的重组病毒rPRRSV-GM-CSF,为进一步研发广谱通用的新型疫苗奠定基础。
- 虞凌雪姜一峰姜一峰杨莘于海周艳君童武高飞李国新刘长龙郑浩单同领李丽薇孔宁
- 关键词：杀伤性T淋巴细胞
- 抗猪流行性腹泻病毒N蛋白的单克隆抗体及其应用
- 本发明公开了一种抗猪流行性腹泻病毒N蛋白的单克隆抗体。本发明还公开了诊断猪流行性腹泻病毒感染的试剂盒，其包含上述单克隆抗体。本发明还公开了该单克隆抗体的制备方法和应用。本发明抗猪流行性腹泻病毒N蛋白的单克隆抗体，与猪流行...
- 童光志单同领潘溪孔宁李国新童武郑浩杨莘
- PEDV N蛋白的原核表达与ELISA方法的建立
- 为建立猪流行性腹泻病毒N蛋白间接ELISA检测方法,本研究从新分离PEDV流行株(JS-2013)中扩增其N基因,并将N基因克隆至pColdⅠDNA原核表达载体中,构建pColdⅠDNA-N重组质粒,经过IPTG诱导表达...
- 孔宁潘溪童武李国新郑浩周恩民单同领童光志
- 关键词：猪流行性腹泻病毒N蛋白原核表达抗体检测
- 文献传递
