耿辉
- 作品数：7 被引量：26H指数：4
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组纤维连接蛋白多肽CH50对黑色素瘤B16细胞侵袭能力的抑制作用及机制被引量：6
- 2006年
- 目的研究重组纤维连接蛋白多肽CH50对黑色素瘤B16细胞侵袭能力抑制作用及其机制。方法将小鼠黑色素瘤B16细胞用CFSE标记,经尾静脉注射接种小鼠,分别在6 h和24 h取肺组织作冰冻切片,观察肿瘤细胞在肺部聚集和对肺组织侵袭情况;接种15 d后解剖小鼠取肺,观察B16细胞在肺表面形成转移结节数量差异;观察CH50多肽对B16细胞结合纤维连接蛋白和纤维蛋白原的影响;RT-PCR法检测B16细胞中转移相关基因的表达水平;zymography法检测MMP-9水平。结果CH50多肽短时间作用于B16细胞,注射细胞6 h后肺组织荧光结节数显著减少;而作用较长时间,注射细胞24 h后肺组织荧光结节数减少更为明显。CH50多肽处理过的B16细胞在肺部形成转移结节明显减少。CH50多肽能够显著抑制B16细胞结合纤维连接蛋白及结合后的细胞铺展能力及B16细胞结合纤维蛋白原的能力,能够显著下调B16细胞cdc2、αv、β3、MMP-9等基因的表达与MMP-9分泌。结论CH50多肽能够抑制黑色素瘤B16细胞的侵袭能力,抑制瘤细胞与黏附分子结合,抑制转移相关基因的表达,从而使肿瘤细胞的生物学特征发生改变。
- 吴丰华张桂梅刘毅耿辉李东袁野肖晗冯作化
- 关键词：纤维连接蛋白黑色素瘤纤维蛋白原
- 重组多肽CH50抑制肿瘤细胞侵袭生长和血管形成能力被引量：7
- 2006年
- 目的观察纤连蛋白重组多肽CH50对小鼠肝癌细胞侵袭和肿瘤血管形成能力的影响,探讨CH50多肽治疗肿瘤可能的分子机制。方法接种H22肝癌细胞建立小鼠肿瘤模型,采用裸DNA-尾静脉注射方法在小鼠体内表达CH50多肽,进行基因治疗。HE染色观察治疗后肿瘤细胞侵袭能力和血管形成的改变；逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和明胶电泳检测肿瘤组织边缘基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA和蛋白表达及活性；体外培养H22细胞,检测CH50多肽对相关基因表达和细胞黏附能力的影响。结果小鼠体内非定位转染表达CH50多肽,对肿瘤生长具有明显的抑制作用,接种后第16天,治疗组瘤重为(0．78±0．18)g,低于质粒对照组和空白对照组(P＜0．05)；从组织水平观察,CH50多肽治疗导致肿瘤细胞大量坏死,可抑制肿瘤细胞侵袭生长和肿瘤血管生成,抑制肿瘤血管建立侧支循环。pCH510治疗组的肿瘤边缘组织中,活性型MMP-9的含量为3．2±0．7,显著低于空白对照组和质粒对照组,且活性型MMP-9占总MMP-9的比例也显著降低,是空白对照组和质粒对照组的1/4左右,但对MMP-9 mRNA表达没有明显影响。CH50多肽可下调H22细胞的αv、β3、cdc2基因的表达水平,降低H22细胞整合素αvβ3的活性。结论CH50多肽可以通过影响MMP-9和整合素αvβ3的功能起到抑制肿瘤生长、侵袭和肿瘤血管形成的作用。
- 于智睿张桂梅李东刘毅耿辉肖晗吴丰华冯作化
- 关键词：基质金属蛋白酶-9整合素ΑVΒ3
- 可溶性PD-1及联合Hsp70-B16抗原肽复合物对小鼠黑素瘤肺转移的抑制作用被引量：3
- 2007年
- 目的探讨黑素瘤肺转移小鼠模型体内表达可溶性PD-1(sPD-1)对B7-H1/PD-1信号传导的阻断作用,及联合Hsp70-B16抗原肽对小鼠黑素瘤肺转移的抑制作用。方法建立小鼠黑素瘤肺转移模型,应用免疫组织化学染色和流式细胞术检测肺转移灶PD-1及B7-H1的表达情况,从小鼠尾静脉注射sPD-1表达质粒,并联合应用Hsp70-B16抗原肽皮下免疫小鼠,于接种瘤细胞后第17天解剖小鼠,观察黑素瘤肺转移的情况,检测各组小鼠肺转移灶局部淋巴细胞浸润及部分免疫学指标。结果小鼠黑素瘤肺转移模型成功建立,肺转移灶局部有大量的PD-1阳性细胞,转移瘤B16细胞表面表达较多B7- H1分子,静脉注射sPD-1表达质粒联合抗原肽免疫治疗组小鼠肺转移明显受抑制,抑制率达95%,显著高于对照组,其对应组小鼠肺部CD8^+T淋巴细胞的数量、脾淋巴细胞的细胞毒活性及血清中的IL-2和IFN-γ的浓度均明显高于对照组(P<0.01)。结论小鼠体内转染表达sPD-1可阻断B7-H1/PD-1信号传导,抑制小鼠黑素瘤肺转移,联合应用Hsp70-B16抗原肽具有明显的协同作用。
- 邱惠张桂梅张慧耿辉冯作化
- 关键词：HSP70热休克蛋白质类SPD-1
- 可溶性PD-1和4-1BB配体在体内联合表达对小鼠实验性肝癌的治疗作用被引量：4
- 2006年
- 目的了解4-1BB配体(4-1BBL)治疗小鼠实验性肝癌时可能引起的负调控因素,以及可溶性PD-1(sPD 1)与4-1BBL协同治疗肿瘤的效应和机制。方法按照5×105／只的剂量将H22肝癌细胞接种于Balb／c小鼠右后腿肌肉内,建立小鼠实验性肝癌模型,随机分成5组,每组12只。空白对照组注射等渗盐水;pcDNA3．1组、p4-1BBL组和 pPD-1A组分别注射质粒pcDNA3．1、p4-1BBL和pPD-1A;p4-1BBL+pPD-1A组为联合治疗组,同时注射质粒p4- 1BBL和pPD-1A。观察小鼠肿瘤生长情况及存活率,检测两种基因在瘤周组织中的表达,对各组小鼠残存瘤细胞进行表型分析,检测肿瘤组织中的淋巴细胞。结果单独或联合转染4-1BBL基因和sPD-1基因均显示出抗肿瘤作用．尤以联合转染组小鼠肿瘤的生长抑制效果最为明显,该组有42％的小鼠肿瘤被完全抑制(其他各组完全抑制率为0);至实验第6周,联合转染组小鼠存活率达到100％,明显高于pcDNA3．1组(30％)、1)4-1BBL组(65％)、pPD-1A组(62％)。流式细胞术检测结果表明,p4-1BBL组残存瘤细胞上负调节性分子B7-H1和B7-DC的表达水平明显高于其他各组瘤细胞, 联合治疗组小鼠瘤周组织中CD8(?)T淋巴细胞数量明显增加。结论4-1BBL在促进抗肿瘤免疫应答的同时．也会引起负调节因素的上调,sPD-1可与4-1BBL产生协同治疗效应,增强机体抗肿瘤作用。
- 邱惠张慧冯作化耿辉张桂梅
- 关键词：基因疗法共刺激分子4-1BB配体
- sPD-1和4-1BBL体内联合表达对小鼠实验性肝癌的治疗作用被引量：3
- 2006年
- 目的探讨sPD-1和4-1BBL联合治疗肿瘤的效应和相关的免疫学机制。方法以H22肝癌细胞接种于BALB／c小鼠右后腿肌肉内,建立小鼠肿瘤模型;采用4-1BBL和可溶性PD-1(sPD- 1)真核表达质粒通过肌肉转染进行基因治疗;检测小鼠肿瘤生长情况,并检测转染基因及肿瘤微环境中免疫调控相关基因的表达,检测肿瘤组织中的淋巴细胞数量的变化。结果单独转染4-1BBL基因或sPD-1基因均显示出抗肿瘤作用,而联合治疗对肿瘤生长抑制作用更为明显,该组抑瘤率高达92．3％(以pcDNA3．1组为对照),显著高于4-1BBL组(78％)、sPD-1组(70．2％)。联合治疗不仅使TGF-β、IL-10的表达下调,而且在治疗后期更有效地促进IFN-γ和IL-2基因表达上调,且使瘤组织中CD8+T淋巴细胞数量较其他各组显著增加。结论4-1BBL和sPD-1联合治疗可使肿瘤微环境中的免疫相关基因表达更有利于抗肿瘤免疫应答,增强肿瘤免疫治疗效果。
- 韩凌斐张桂梅刘毅李东邱惠耿辉肖晗吴丰华冯作化
- 关键词：4-1BBLSPD-1共刺激分子基因治疗肝癌
- 肿瘤组织中Tim-3表达的特征及其在肿瘤免疫耐受中的作用被引量：8
- 2005年
- 目的:研究小鼠肿瘤发生早期两型含T细胞免疫球蛋白及黏蛋白结构域的分子3(Tim3)的表达特点,以及与免疫调节相关基因表达的时空关系,并探讨其在诱导肿瘤免疫耐受中的作用。方法:建立小鼠实体瘤模型,采用RTPCR法检测肿瘤组织中可溶型Tim3(sTim3)和膜型Tim3(flTim3),以及叉头盒P3(forkheadboxP3,Foxp3)、细胞毒性T淋巴细胞抗原4(CTLA4)、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体家族相关受体(GITR)、TGFβ、IL10和IFNγ等在不同时相的表达及相应时相肿瘤的生长情况。结果:在早期的肿瘤组织中,sTim3的表达先于flTim3,其后flTim3大量表达,而sTim3的表达则下调直至消失。Foxp3和GITR随flTim3同时表达并逐步上调。CTLA4的表达先于flTim3,并随着时间的推移表达上调。flTim3同Foxp3的表达具有空间位置的一致性。flTim3、Foxp3和CTLA4的表达水平同肿瘤的生长呈正相关。结论:随着肿瘤不断的生长,肿瘤局部的免疫应答逐渐趋向于负调节。flTim3在诱导肿瘤免疫耐受的过程中发挥着重要作用,而sTim3可能起着不同的作用。
- 朱汉钢冯作化耿辉张桂梅
- 关键词：肿瘤免疫耐受
- 重组FN多肽CH50促进肿瘤微环境正向免疫调节效应
- 2006年
- 目的：探讨体内非靶向转染表达重组FN多肽CH50对肿瘤的抑制作用及其相关机制。方法：BALB/c小鼠接种肝癌细胞后,实验组采用基于流体动力学方法体内非靶向转染CH50真核表达质粒,对照组分别注射对照质粒或生理盐水。接种后观察肿瘤生长情况；RT-PCR检测治疗过程中肿瘤局部组织B7-1、B7-H1等基因的表达变化；流式细胞术检测分析肿瘤局部T淋巴细胞的数量。结果：体内非靶向基因转染表达CH50对肿瘤产生显著的抑制作用；肿瘤组织中B7-1、BT-H1等基因的表达随着肿瘤生长而上调；CH50治疗后可使B7-1/B7-H1及B7-1/B7-DC的比值显著增高,同时显著抑制IL-10和TGF-β基因的表达；CH50直接作用于瘤细胞可导致TGF-β基因表达下调；治疗组的肿瘤组织TIL数量显著高于对照组。结论：非靶向转染表达CH50可有效抑制肿瘤生长,对肿瘤微环境中免疫基因表达的调节是其作用机制的重要方面。
- 项锦毅张桂梅耿辉袁野刘毅李东肖晗吴丰华冯作化
- 关键词：免疫调节共刺激分子细胞因子
