李海东
- 作品数：5 被引量：20H指数：3
- 供职机构：国家海洋局第一海洋研究所海洋生态研究中心更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金国家重点实验室开放基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学环境科学与工程更多>>
- 等鞭金藻的电转化体系被引量：4
- 2012年
- 以等鞭金藻(Isochrysis sp.CCMM5001)为材料,探索了影响其电转化的主要因素,建立了等鞭金藻电转化体系。结果表明,真空抽滤法收集藻体获得的细胞存活率明显高于离心收集法;藻体收集的最适缓冲液为1.0 mmol/L HEPES(pH7.5)(含0.5 mol/L蔗糖);相同电场强度下,对数早期的藻细胞存活率最高,早、中、晚期的半致死电场强度分别为0.82～1.63 kV/cm、0.79～1.34 kV/cm、0.54～1.18 kV/cm;最佳脉冲时间为5 ms;冰浴时间为10 min。通过电击转化法向球等鞭金藻中导入质粒pCAMBIA2301,并对转基因球等鞭金藻进行GUS组织化学染色和GUS荧光定量分析,检测pCaMV 35S启动下的GUS报告基因的表达。得到转基因球等鞭金藻的GUS活性为0.52 nmolMU/(min.mg)。通过PCR方法检测固体平板上的单藻落,结果显示转化藻株能够检测到nptII基因。本研究建立了等鞭金藻的电转化体系,为外源基因的导入及其功能的研究奠定了基础。
- 李海东仝颜丽郑立王玲刘峰郑明刚
- 关键词：等鞭金藻电转化存活率GUS报告基因
- 荣成湾海域细菌时空变化分析被引量：1
- 2011年
- 分别采用流式细胞术（FCM）、平板计数法和滤膜法对2009年荣成湾水体中浮游细菌丰度、鳗弧菌和粪大肠菌群数量进行测定，并探讨了浮游细菌丰度与环境因子的相关性。结果显示，水样中浮游细菌丰度变化范围为3．1×10^8～3．3×10^9个／L，其中最高值在R7站位，分布呈现较强时间性和区域性；鳗弧菌数量变化范围为2．0×i0。～6．16×10e个／I。；粪大肠菌群最高值为800个／L，低于我国海水水质标准（≤2000个／L）。同时对2009—02，05，08，11浮游细菌丰度与环境因子的相关性进行分析，得出：2009—02，05，温度（低于12℃）与浮游细菌丰度成正相关；2009—08，温度、N03、NH＋和PO43-与浮游细菌丰度成正相关，DO值与浮游细菌丰度呈负相关；200911，NO3-与浮游细菌丰度呈正相关。因此上述因子是限制该海域浮游细菌丰度分布的关键因子。
- 梁科鹏李海东傅明珠蒲新明屈佩郑明刚
- 关键词：浮游细菌鳗弧菌粪大肠菌群环境因子
- 六溴环十二烷(hexabromocyclododecane,HBCD)暴露对生长阶段文昌鱼的毒性及其几种重要酶活性的影响被引量：12
- 2011年
- 以文昌鱼为研究对象,研究了在六溴环十二烷暴露下对文昌鱼造成的机体氧化损伤.通过检测相关酶活变化情况,如酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD),从而确定低剂量长期暴露HBCD对文昌鱼鱼体产生氧化损伤效应的机制.急性毒性实验结果表明,文昌鱼暴露于六溴环十二烷饱和溶液(8.6ng·mL-1)96h后未有死亡发生,说明该物质毒性相对较小;亚慢性毒性试验表明,梯度暴露实验设置浓度分别为1.00、2.15、4.30、8.60ng·mL-1,暴露时间为14d,按体长将处于Ⅱ龄(2.0～2.8cm)和Ⅲ龄(3.2～4.0cm)的文昌鱼分别投毒检测,实验结果与对照组比较:Ⅱ龄文昌鱼的ACP、ALP、SOD活性均在1ng·mL-1浓度范围内受促进作用显著,2.15ng·mL-1时受抑制作用显著,然后随浓度升高酶活升高.CAT在2.15ng·mL-1时受促进作用显著,当浓度大于2.15ng·mL-1时受抑制作用显著,但并无明显剂量关系.Ⅲ龄文昌鱼总体上酶活变化较小,也无剂量关系.结果表明HBCD对Ⅱ龄文昌鱼的4种酶活影响比Ⅲ龄显著,与对照组相比,所有暴露组文昌鱼体重增长缓慢(p<0.05).
- 王玲郑明刚仝艳丽李海东孙修勤
- 关键词：文昌鱼超氧化物歧化酶(SOD)
- 大泷六线鱼(Hexagrammos otakii)荧光AFLP分析体系的建立及优化
- 2011年
- 以大泷六线鱼为材料,通过对DNA提取质量和浓度、EcoRⅠ/MseⅠ酶切反应时间、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度以及选择性扩增中预扩增产物稀释倍数等关键因素进行研究,建立并优化了大泷六线鱼荧光AFLP分子标记反应体系。用优化的反应体系,筛选到10对适合大泷六线鱼的引物,为今后利用AFLP标记技术进行大泷六线鱼的遗传多样性研究提供了标准化程序。
- 仝颜丽李海东王玲王波郑明刚
- 关键词：大泷六线鱼DNA提取
- 五种抗生素对等鞭金藻(Isochrysis sp.CCMM5001)叶绿素荧光特性的影响被引量：3
- 2011年
- 利用PHYTO-PAM测定了抗生素胁迫下等鞭金藻(Isochrysis sp.CMM5001)叶绿素荧光参数Fv/Fm(PSⅡ的最大光能转化效率)的变化规律。结果表明:不同抗生素对等鞭金藻Fv/Fm的影响存在很大差异,氯霉素、G-418能显著抑制其最大光能转化效率;潮霉素抑制作用次之;卡那霉素、氨苄青霉素没有抑制作用。在f/2培养基中,浓度为600 mg/L氯霉素胁迫下,第3 d测得Fv/Fm值下降97%。在f/2培养基中,浓度为1 200 mg/L潮霉素和500 mg/L G-418胁迫下,第6 d测得Fv/Fm值分别下降52%、98%。在淡化5倍f/2培养基中,浓度为1200 mg/L潮霉素和500 mg/L G-418胁迫下,第6 d测得的Fv/Fm值分别下降77%、100%。卡那霉素、氨苄青霉素胁迫下,Fv/Fm随着两种抗生素浓度的增加没有降低,反而上升。
- 郑明刚郑立王玲韩笑天李海东崔志松
- 关键词：等鞭金藻FV/FM抗生素
