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王继荣

作品数：1 被引量：2H指数：1
供职机构：浙江大学城市学院更多>>
发文基金：浙江省自然科学基金更多>>
相关领域：生物学更多>>

合作作者

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇生物学

主题

  • 1篇整合素
  • 1篇整合素类
  • 1篇前列腺
  • 1篇前列腺肿瘤
  • 1篇肿瘤
  • 1篇细胞
  • 1篇腺肿瘤
  • 1篇慢病毒
  • 1篇慢病毒属
  • 1篇慢病毒载体
  • 1篇慢病毒载体构...
  • 1篇过表达
  • 1篇白细胞
  • 1篇白细胞介素
  • 1篇白细胞介素类
  • 1篇病毒
  • 1篇病毒载体

机构

  • 1篇浙江大学城市...
  • 1篇台州市中心医...

作者

  • 1篇曾玲晖
  • 1篇丁燕
  • 1篇王继荣

传媒

  • 1篇浙江大学学报...

年份

  • 1篇2014
共 1 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
整合素连接激酶基因敲降和黑色素瘤分化相关基因过表达慢病毒载体构建和鉴定被引量：2
2014年
目的：建立整合素相关激酶（ ILK）基因敲降和黑色素瘤分化相关基因（ mda7）过表达慢病毒包装表达系统。方法：针对人ILK基因序列，设计基因敲降靶点序列（A、B、C），通过限制性内切酶HpaⅠ和XhoⅠ双酶切、T4 DNA连接酶连接，将ILK插入慢病毒载体pSicoR-eGFP，构建siILK-pSicoR-eGFP重组质粒；根据人mda7基因序列，设计引物扩增mda7全长，并插入慢病毒载体pLVX-Puro，构建mda7-pLVX-Puro重组质粒。经双酶切及测序鉴定正确后通过脂质体将慢病毒四质粒系统共转染人胚肾细胞系293 T细胞，进行慢病毒包装并测定病毒滴度、观察感染效率。各组病毒载体转染PC-3细胞后，用定量PCR和蛋白质印迹法检测ILK基因和mda7 mRNA转录水平及蛋白表达水平。通过MTT法和Transwell实验考察ILK和mda7对PC-3细胞增殖和迁移的影响。结果：成功构建ILK基因敲降及mda7过表达的慢病毒载体，四质粒系统共转染293 T细胞后可见大量绿色荧光染色阳性细胞。浓缩病毒后293 T细胞的感染效率在90％以上，并能高效率感染PC-3前列腺癌细胞。 ILK-A-pSicoR-eGFP和ILK-B-pSicoR-eGFP组ILK干扰效果最佳（P＜0．05），mda7的表达水平远高于对照组（P＜0．05），且持续稳定表达至少1个月。 ILK和mda7对PC-3细胞的增殖在96 h内有明显抑制作用，并对其迁移亦有显著抑制（均P＜0．05）。结论：成功构建并鉴定人ILK 基因敲降和mda7过表达慢病毒载体，可为探讨ILK和mda7基因在肿瘤细胞中的生物学功能提供良好工具，也为探索安全、高效的肿瘤治疗途径奠定实验基础。
杨幼萍丁燕王继荣曾玲晖林红霞朱杨丽吴宏卫王若燕张建民应荣彪
关键词：整合素类前列腺肿瘤白细胞介素类慢病毒属
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