郑海燕
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：四川师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 人胰岛素原基因在大肠杆菌中的可溶性表达及分离纯化研究被引量：1
- 2016年
- 根据NCBI中的人胰岛素原基因序列及大肠杆菌密码子偏爱性设计特异引物,PCR扩增得到人胰岛素原基因,构建该基因的原核表达质粒p ET32-PI,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。对重组菌进行温度和IPTG浓度优化,发现重组菌在30℃和终浓度为0.6 mmol/L的IPTG条件下表达效果最好且没有包涵体,经SDS-PAGE和Westem blot检测,表达蛋白的相对分子质量与理论相对分子质量一致且具有胰岛素的免疫原性,证明胰岛素原基因得到了正确表达。对重组菌进行流加发酵,发酵液离心收集菌体,破菌后上清液过亲和层析柱和离子交换柱分离纯化目的蛋白,透析后的样品用肠激酶和羧肽酶酶切,利用亲和柱去除融合蛋白与His标签,最终分离胰岛素样品,利用免疫酶标法,l m L样品测得活性92μIU,证明实验所得样品具有人胰岛素活性。
- 沈加斌徐攀李鑫雨张立郑海燕雍彬
- 关键词：人胰岛素原大肠杆菌发酵分离纯化
- 甘薯TPS基因家族分析及IbTPS7a基因克隆与功能研究
- 2018年
- 为了研究甘薯TPS基因家族及功能,采用生物信息学手段分析鉴定了甘薯转录组数据库中7个TPS基因,并对甘薯TPS基因家族编码蛋白进行了进化树分析,结果发现7个IbTPS基因可以分成两个亚家族,IbTPS7a蛋白与Nicotiana sylvestris和Solanum tuberosum的TPS7蛋白亲缘关系最接近。利用RT-PCR技术成功克隆得到全长为2 568 bp的IbTPS7a基因,将IbTPS7a基因转化大肠杆菌和酿酒酵母进行过表达,实验结果发现在非生物胁迫下重组菌株的生长趋势或生存率有明显提升。数字表达谱的结果表明IbTPS7a基因在甘薯不同组织中的表达量并不相同,其在茎中的表达量最高,在须根中的表达量最低。以上结果表明甘薯中也存在TPS基因家族,IbTPS7a可以有助于提升细胞在非生物胁迫下的抗逆能力。
- 邵欢欢郑海燕廖若星徐攀费雪婷雍彬马沁沁袁向华王晓燕
- 关键词：甘薯海藻糖抗逆
