张慧杰
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 供职机构：广西大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 单因素优化提高重组毕赤酵母β-呋喃果糖苷酶产量被引量：1
- 2017年
- 产生低聚果糖的β-呋喃果糖苷酶(β-fructofuranosidase,FFase)是一种具有广泛应用前景的工业酶。为了提高重组毕赤酵母生产FFase的产量,对重组毕赤酵母接种量、摇瓶装液量、甲醇添加量、山梨醇与甲醇共混4个因素进行单因素优化。研究结果表明,接种量为5%时酶活力达到8.35 U/m L,甲醇添加量为0.8%时酶活力达到6.89 U/m L,山梨醇添加量为1.5%时酶活力达到9.49 U/m L,装液量为20 m L时酶活力达到27.34 U/m L。在最优条件下诱导重组毕赤酵母,FFase酶活可达到33.46 U/m L,较优化前提高了4.86倍。该研究为进一步优化毕赤酵母FFase发酵条件和提高FFase产量奠定了一定基础。
- 赵西浩张慧杰张慧杰秦秀林
- 关键词：毕赤酵母发酵过程优化Β-呋喃果糖苷酶
- 毕赤酵母截短PGK1启动子与不同终止子组合调控外源基因表达
- 2022年
- 【目的】调控多基因表达对于优化代谢途径和合成生物学应用至关重要,构建不同的启动子和终止子组合,可作为毕赤酵母代谢途径改造和优化外源基因表达的有力分子调控工具。【方法】首先,将毕赤酵母组成型磷酸甘油酸激酶基因的启动子P_(PGK1)进行截短,构建截短启动子分别调控报告基因(绿色荧光蛋白基因egfp和β-半乳糖苷酶基因lacZ)表达的毕赤酵母重组菌。检测重组菌的报告基团转录水平、荧光强度和β-半乳糖苷酶产量。然后,构建了不同强度启动子和终止子组合(共27种组合)调控egfp表达的重组菌。最后,选取能调控基因高、中、低表达的6个启动子-终止子组合,调控β-呋喃果糖苷酶基因表达,构建β-呋喃果糖苷酶分泌表达的重组菌。【结果】构建的截短启动子(PPP、P_(PE)、P_(PG)和P_(PD))的强度是野生型启动子P_(PGK1)的70%–190%,最强的启动子为P_(PD)。分别与9个终止子组合时,P_(PG)、P_(PE)和P_(PD)启动子驱动egfp基因表达的强度最高的和最低的相比分别达到4倍、7倍和10倍。6个启动子-终止子组合调控β-呋喃果糖苷酶分泌表达的重组菌胞外酶产量最高的和最低的相比可达6倍。【结论】构建了不同的启动子-终止子组合,调控基因表达水平最高的和最低的相比达到10倍,可为优化毕赤酵母代谢工程和合成生物学应用中控制不同外源基因的表达量提供有力的分子工具。
- 张慧杰廖思敏凌小翠冯家勋秦秀林
- 关键词：毕赤酵母终止子代谢工程合成生物学Β-呋喃果糖苷酶
- 纤维素酶高产菌株Trichoderma atroviride HP35-3原生质体制备及转化被引量：4
- 2016年
- 旨在优化深绿木霉(Trichoderma atroviride)菌株HP35-3原生质体制备和转化条件,便于对该菌株进行遗传操作以提高其纤维素酶产量。分别对制备深绿木霉原生质体的菌龄、酶解时间、酶组分及比例和转化条件进行优化。结果显示,利用3mg/m L蜗牛酶、3 mg/m L溶菌酶和3 mg/m L裂解酶酶组分酶解菌龄10 h的菌丝2 h,获得的原生质浓度达到3.5×107个/m L以上,原生质体再生率为61%。利用原生质体进行PEG介导转化,当原生质体浓度为1×108个/m L、外源DNA为5μg时,转化率达到35个转化子/μg DNA。建立的高效原生质体制备及转化体系可用于深绿木霉的遗传转化及菌株改造。
- 林艳梅李瑞杰张慧杰秦秀林冯家勋
- 关键词：深绿木霉丝状真菌原生质体制备原生质体转化
