闫丽
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：国家卫生计生委科学技术研究所更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 优化和验证人精浆miRNAs提纯方法被引量：2
- 2017年
- 目的优化精浆miRNAs提纯方法,为后续实验奠定基础。方法收集国家卫生计生委科研所生殖健康服务中心正常精液样本5例,非梗阻性无精子症(NOA)患者(经北京大学第三医院检查确诊)精液样本22例。根据不同RNA提取方法分为4组:Trizol LS组、蛋白酶K+Trizol LS组、miRNeasy Micro kit组及Trizol LS+miRNeasy Micro kit联合使用组(改良组)。比较4组提纯NOA患者精浆RNA的OD260/280,使用Agilent2100生物分析仪检测改良法提纯精浆miRNAs的纯度和质量,采用实时定量PCR方法比较4组精浆miR-106b的溶解曲线,并比较精液参数正常组(n=5)和NOA患者组(n=10)精液样本中的miR-106b的表达量。结果改良组提纯精浆RNA的OD260/280为(1.90±0.03)显著高于其他3组(P<0.05);改良组提纯精浆miRNAs的完整数合格,色谱图位置特异性明显,峰值清晰;4组miR-106b的溶解曲线中,改良组曲线符合标准;NOA患者精浆中miR-106b的表达丰度显著低于参数正常组(P<0.01)。结论Trizol LS与miRNeasy Micro kit联合使用提纯的精浆miRNAs质量好,能满足后续实时定量PCR、深度测序等实验要求。小样本分析发现NOA患者精浆miR-106b含量显著低于精液参数正常组,有待大样本验证其是否能作为临床诊断NOA的分子指标。
- 闫丽张瑶楠张蔚陈娟高丽娜陆彩玲刘美玲
- 关键词：精浆MIRNAS实时定量PCR
- 可控性Speedy A基因表达转基因小鼠模型的建立鉴定和表型分析
- 2016年
- 目的建立基于Tet-On系统诱导表达的Speedy A基因RNA干扰转基因小鼠模型,探讨Tet-On系统在研究精子发生相关基因中的应用,研究Speedy A基因下调对精子发生的影响。方法体外实验筛选下调Speedy A基因表达的有效干扰片段,Gateway技术构建包含有效干扰片段和四环素反应元件(TRE)的质粒(pRP.EX2d-TRE>shSpdya),受精卵显微注射该质粒建立转基因小鼠并筛选到纯合子,然后与四环素调控的反式激活子(rtTA)转基因小鼠杂交,筛选TRE和rtTA双阳性的小鼠为四环素诱导的Speedy A-RNA干扰转基因小鼠模型,喂食强力霉素(Dox)诱导RNA干扰片段的表达下调Speedy A基因的表达;实时荧光定量PCR法检测模型组小鼠与喂食强力霉素的正常小鼠(对照组)Speedy A的表达差异;HE染色观察睾丸组织形态学变化,TUNEL法检测小鼠睾丸组织的细胞凋亡情况。结果模型组小鼠Speedy A基因的表达量与对照组小鼠的表达量相比下降26%;模型组小鼠睾丸组织发生异常的生精细胞凋亡。结论成功建立了基于Tet-On系统诱导表达的可控性Speedy A-RNA干扰转基因小鼠模型,说明可以基于Tet-On系统在体研究精子发生相关基因的功能;Speedy A基因表达下调可使生精细胞发生异常凋亡。
- 李媛媛张瑶楠闫丽贾孟春刘美玲
- 关键词：SPEEDYA基因精子发生
