- Twist1稳定表达细胞株的建立及对乳腺癌细胞上皮-间充质转变的影响被引量：2
- 2016年
- 目的:构建Twist1的慢病毒真核表达载体,并建立稳定表达Twist1的乳腺癌细胞株,研究Twist1在乳腺癌中对上皮-间充质转变(EMT)的影响。方法:以乳腺文库为模板,PCR扩增Twist1编码序列,克隆到慢病毒p CDH载体,构建成p CDH-Twist1,转染293T细胞,Western印迹鉴定p CDH载体介导的Twist1的表达;包装病毒载体,感染ZR75-1细胞,用嘌呤霉素筛选得到稳定表达Twist1的细胞株,检测ZR75-1细胞对EMT的影响。结果:经Bam HⅠ、Eco RⅠ双酶切及测序证实得到p CDH-Twist1表达载体,Western印迹实验发现Twist1在293T细胞内表达;嘌呤霉素筛选得到稳定表达Twist1的ZR75-1细胞株。结论:构建了p CDH-Twist1的真核表达载体并建立了稳定表达Twist1的ZR75-1细胞,为进一步研究Twist1在EMT过程中的机制奠定了基础。
- 宋玉华陈滢洁张亚楠刘婕罗晓丽贾晓蒙李欣姜潇丁丽华叶棋浓
- 关键词：TWIST1E-钙黏蛋白乳腺癌细胞
- Slug真核表达载体构建及功能鉴定
- 2017年
- 目的在肿瘤发生和发展过程中,上皮细胞-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是上皮来源恶性肿瘤细胞获得侵袭、转移能力的重要生物学过程,并且与乳腺癌干细胞的生物学特性密切相关。本研究通过构建Slug的慢病毒真核表达载体,探讨Slug基因与EMT之间的关系及对乳腺癌干细胞生物学特性的影响。方法以军事医学科学院(生物工程研究所)保存的乳腺cDNA文库为模板,通过PCR扩增出Slug的全长编码序列,将其克隆到经BamHⅠ和EcoRⅠ酶切的PCDH表达载体上,构建成PCDH-Slug真核表达载体,在人293T细胞中转入空载体和重组质粒,利用蛋白质印迹法检测PCDH载体介导的Slug的表达。后将包装质粒共转染293T细胞,包装病毒,感染ZR75-1细胞,经Puro(嘌呤霉素)筛选2周后,得到稳定表达Slug的ZR75-1细胞株,检测ZR75-1细胞对EMT的影响。并将稳定表达Slug的ZR75-1稳定细胞接种于的Matrigel基质胶,倒置显微镜观察ZR75-1稳定细胞株的成管特性。结果从乳腺文库中获得Slug的全长编码序列,经BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切及DNA测序证实得到PCDH-Slug表达载体,PCDH-Slug真核表达载体和PCDH分别转染293T细胞后,经过蛋白质印迹法检测Slug在293T细胞内有显影,对照组明显减弱,表明Slug-PCDH载体携带的Slug编码序列能够在293T细胞中成功;通过增加puro的含量进行筛选,得到稳定表达的混合克隆即能表达Slug的ZR75-1细胞株,经蛋白质印迹法检测PCDH-Slug对E-cadherin的影响,以GAPDH为内参,结果比对照组的表达减弱,与预期相符,表明PCDH-Slug载体可以使细胞中E-cadherin的表达减弱;倒置显微镜下ZR75-1稳定细胞株成管明显,表明Slug可以通过调节EMT使乳腺癌细胞具有某些干性特征。结论调节Slug基因表达可以影响EMT相关蛋白的表达,并以此影响乳腺癌干细胞的生物学特性。
- 李欣姜潇陈滢洁孙银萍宋玉华
- 关键词：乳腺癌SLUGE-CADHERIN
- Snail真核表达载体的构建及功能鉴定
- 2016年
- 目的:构建Snail的慢病毒真核表达载体,并研究Snail在肿瘤发生和发展过程中对上皮-间质转化(EMT)的影响。方法:以乳腺文库为模板,PCR扩增Snail的全长编码序列,将其克隆到p CDH表达载体上,构建成p CDH-Snail真核表达载体,转染293T细胞,Western印迹检测p CDH载体介导的Snail的表达;与包装质粒共转染293T细胞,包装病毒后感染ZR75-1细胞,经嘌呤霉素筛选2周,得到稳定表达Snail的ZR75-1细胞株,检测ZR75-1细胞对EMT的影响,同时用倒置荧光显微镜观察ZR75-1稳定细胞株中上皮钙粘蛋白分布的变化。结果:Bam HⅠ、XbaⅠ双酶切及测序证实得到p CDH-Snail表达载体,Western印迹表明Snail在293T细胞内得到成功;经嘌呤霉素筛选,获得稳定表达Snail的ZR75-1细胞株;在倒置荧光显微镜下观察,ZR75-1稳定细胞株中的上皮钙粘蛋白绿色荧光明显减弱。结论:构建了p CDH-Snail的慢病毒真核表达载体,建立了稳定表达Snail的ZR75-1细胞,为进一步研究Snail在EMT过程中的机制奠定了基础。
- 陈滢洁姜潇李欣张亚楠刘婕罗晓丽贾晓蒙丁丽华叶棋浓宋玉华
- 关键词：SNAIL上皮钙粘蛋白上皮-间质转化真核表达载体
- Tils对于曲妥珠单抗在Her-2阳性乳腺癌疗效中的预测价值
- 目的： 乳腺癌是我国女性常见的恶性肿瘤之一，有15%-23%的乳腺癌患者Her-2阳性。Her-2阳性乳腺癌患者恶性程度较高，且预后较差，严重威胁着女性健康。曲妥珠单抗是一种针对Her-2阳性乳腺癌的特异性靶向药物。大...
- 姜潇
- 关键词：乳腺癌靶向治疗曲妥珠单抗肿瘤浸润淋巴细胞预后评价
- 文献传递
- 锁骨骨肉瘤1例
- 2018年
- 1病例简介女,56岁,主诉：左侧胸壁肿块并渐进性增大3个月。体格检查：左侧胸壁触及一软组织肿块,大小约5.0 cm×4.0 cm,质硬,与周围粘连。影像学表现见图1A-F,影像学诊断为锁骨恶性骨肿瘤。患者于我院骨肿瘤科行左锁骨肿物切除内固定术,沿肿瘤边界外侧缘由锁骨头离断锁骨,完整切除肿瘤组织送病理检查,术中见肿瘤包块位于锁骨胸骨端,质硬,活动度差。
- 姜潇安玉芬张雨
- 关键词：骨肉瘤锁骨X线影像增强磁共振成像病例报告
