徐健
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 酵母双杂交表达载体pGADT7-AtTGA2的构建及酵母菌的转化
- 2014年
- [目的]研究TGA2在植物系统获得抗性中所起的作用,阐明其作用机制。[方法]通过PCR扩增获得拟南芥中TGA2基因全长CDS序列,克隆至p GADT7酵母表达载体,并转化至AH109酵母菌株中。[结果]重组质粒通过大肠杆菌转化获得了阳性克隆,经过菌落PCR及单、双酶切验证重组质粒构建成功。将重组质粒又转化到AH109酵母菌中,并在相应筛选培养基上成功获得了转酵母菌成功的阳性克隆。[结论]为进一步研究TGA2参与水杨酸诱导抗性基因表达的作用机制奠定了良好的基础。
- 何乐肖牧徐健阮颖
- 罗勒烯信号传导途径高通量活体荧光筛选体系的建立
- 已有的研究表明：罗勒烯能诱导JA/ET途径的指示基因PDFl.2和SA途径的指示基因PRl的同时表达,说明β-罗勒烯信号传导途径与茉莉酸和水杨酸的并不完全相同。因此,为了高效率地筛选罗勒烯信号传导途径上的各信号传递成分的...
- 徐健
- 文献传递
- 罗勒烯信号传导途径各组分突变体高通量活体荧光筛选技术系统的建立被引量：2
- 2015年
- 为了高效率地发现罗勒烯信号传导途径上的各信号传递成分,本研究拟采用正向遗传学的策略,即利用EMS诱变与荧光素酶-荧光素活体荧光成像检测技术体系相结合的方法筛选突变体。为此,构建了指示基因启动子PR1pro::Luciferase和PDF1.2pro::Luciferase质粒并转化拟南芥;通过抗性筛选与PCR检测,鉴定获得了T3代转基因纯合子植株。同时,购买了合适的高灵敏CCD相机、暗箱与软件,通过组装调试,成功制造了一台自制的、经济适用的活体荧光检测仪。转基因纯合植株经过茉莉酸、水杨酸或罗勒烯处理和喷施荧光底物后,放到荧光检测仪中,成功观察到了诱导后的转基因植株释放出高亮荧光,说明活体荧光成像检测系统构建成功。这些结果为进一步利用正向遗传学的方法高效筛选罗勒烯信号传导途径中各成分的突变体植株,以及阐明罗勒烯诱导的防御反应的作用机理奠定了良好基础。
- 徐健李浪刘琪文刘春林阮颖
- 关键词：荧光素酶基因
- 酵母双杂交表达载体pGBKT7_NPR1与pGADT7_NPR1的构建及酵母菌的转化
- 2013年
- NPR1是水杨酸介导的系统获得性抗性(SAR)途径中不可或缺的一个转录辅助因子。在SA诱导下,NPR1被转运至细胞核内并与一些转录因子结合,以启动下游基因的表达。本研究通过PCR扩增获得拟南芥中NPR1基因CDS序列,经过限制性内切酶酶切后在T4连接酶作用下分别克隆至pGBKT7与pGADT7酵母表达载体上,并成功将其转化至Gold酵母菌株中。为利用酵母双杂交筛选NPR1参与形成的转录复合体中其它可能存在的蛋白质并阐明其在植物防御信号传导途径中的互作模式奠定了基础。
- 肖牧徐健何乐刘春林阮颖
- 关键词：NPR1基因克隆
