陈明明 作品数:4 被引量:13 H指数:3 供职机构: 贵州医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家科技支撑计划 贵州省科学技术基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
家蝇GAPDH基因的克隆、表达及作为内参的可靠性分析 被引量:6 2016年 目的探讨家蝇甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因在不同饲料饲养、不同发育期及不同组织的转录和表达情况,评价其作为家蝇功能基因研究内参的稳定性。方法运用PCR技术扩增GAPDH基因完整编码序列,生物信息学方法预测该基因及其编码蛋白功能。构建pET-28a(+)-GAPDH重组质粒,转化到大肠埃希菌Transetta(DE3)中进行诱导表达,纯化重组蛋白制备多克隆抗体。运用Real-time PCR和Western blot检测家蝇不同发育期、三龄幼虫不同组织和不同饲养物处理下GAPDH基因的表达情况。结果家蝇GAPDH基因ORF全长999bp,编码332个氨基酸,理论分子质量37.3ku,等电点为8.57,具有GAPDH家族的蛋白保守结构域;构建的重组质粒经PCR及测序鉴定正确;SDS-PAGE分析显示重组质粒在Transetta(DE3)中表达,纯化后的表达产物与目的蛋白大小相符,Western blot显示该蛋白可被相应血清识别;Real-time PCR分析GAPDH基因在不同饲料饲养3龄幼虫、不同发育期均保持较好的转录稳定性,同时,Western blot分析GAPDH分子在家蝇不同发育期及3龄幼虫不同组织中均有表达,且表达量无明显差别。结论 GAPDH基因在不同发育期、不同组织及不同饲养物饲养的家蝇表达稳定,可作为家蝇可靠性内参基因使用。 胡红元 任春丽 尚小丽 陈明明 王宇 王涛 吴建伟关键词:家蝇 克隆表达 内参基因 家蝇抗真菌肽衍生物MAF-1C抗白色念珠菌活性研究 被引量:4 2016年 [目的]探究家蝇抗真菌肽衍生物MAF-1C结构特点及抗白色念珠菌活性。[方法]采用氨基酸替代法设计MAF-1A衍生肽MAF-1C,生物信息学分析其理化特性,微量液体稀释法、菌落计数法检测体外抗白色念珠菌活性,扫描电镜观察对菌细胞结构的影响。[结果]MAF-1C为非跨膜阳离子线状多肽,带8个正电荷,二级结构以α螺旋为主。对白色念珠菌具有抗菌活性,MIC、MFC值分别为0.2 mg/m L和0.5 mg/m L,2×MIC浓度的MAF-1C从作用一开始就发挥抗菌作用,其作用后白色念珠菌细胞表面出现明显的凹陷、裂痕,之后细胞皱缩、裂解死亡,并且菌细胞损伤程度与肽浓度及作用时间呈正相关。[结论]MAF-1C结构参数及对白色念珠菌的抗菌活性均显著优于模板肽,对比模板肽改造后的肽阳离子电荷增加了6个,总平均疏水值(GRAVY)由-1.081升高到0.588,不稳定系数由42.27降低到5.83,MIC由0.6 mg/m L降低到0.2 mg/m L,MFC由0.7 mg/m L降低到0.5 mg/m L,其可通过破坏白色念珠菌细胞结构发挥抗菌作用。 陈明明 王涛 林小金 胡红元 罗振华 吴建伟关键词:家蝇 抗真菌肽 分子设计 白色念珠菌 抗真菌活性 家蝇抗真菌肽MAF-1A的分子改良及抗白色念珠菌活性的研究 目的:以家蝇抗真菌肽MAF-1A为模板,对其氨基酸序列结构进行改造,探讨MAF-1A氨基酸结构与抗菌活性关系,为开发新型抗真菌药物提供依据。 方法: 1、采用氨基酸替代法设计MAF-1A的衍生肽,运用生物信息学软件分... 陈明明关键词:家蝇 抗真菌肽 白色念珠菌 抗真菌活性 家蝇酵母双杂交cDNA文库构建和MD14-3-3互作蛋白筛选 2023年 【目的】构建家蝇Musca domestica酵母双杂交cDNA文库,筛选MD14-3-3互作蛋白。【方法】以家蝇为研究对象,经mRNA纯化、cDNA初级文库构建、重组pGADT7-DEST构建次级文库,构建酵母双杂交筛选系统,构建pGBKT7-MD14-3-3质粒作为诱饵筛选与MD14-3-3相互作用的蛋白,并进行回转验证。【结果】成功构建文库容量为1.6×10^(7) CFU,重组率为100%的家蝇酵母双杂交cDNA文库。酵母双杂交筛选获得2个靶蛋白,回转试验表明mucin-like protein HKR1与抗菌肽ctenidin-1为MD14-3-3的互作蛋白。【结论】从成功构建的家蝇酵母双杂交cDNA文库中筛选出MD14-3-3蛋白的2个互作蛋白,为进一步探究家蝇免疫应答机制奠定了基础。 陈明明 陈明明 赵文静 国果关键词:家蝇 血细胞 酵母双杂交