魏蔷
- 作品数：14 被引量：16H指数：2
- 供职机构：河南省农业科学院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- PCV2b衣壳蛋白C端连接不同B细胞表位对其免疫原性的影响被引量：1
- 2020年
- 为了研制廉价高效的猪圆环病毒2型(PCV2)亚单位疫苗,根据大肠杆菌密码子的偏好性合成PCV2b(GenBank:AY969004.1)cap基因全序列,利用PCR技术,分别将PCV2的2个B细胞表位(226LKDPPLNP233和195HVGLGTAF202)以单独和串联的方式连接到Cap的C端,成功构建至pE-SUMO表达载体,将3个重组载体转化表达菌株BL21(DE3)后诱导表达,经SDS-PAGE分析和Western Blotting鉴定,3种重组蛋白均以可溶形式表达且表达正确。对3种重组蛋白分别进行镍柱亲和层析纯化,再用SUMO蛋白酶除去融合标签,获得无标签的Cap-e1、Cap-e2和Cap-e12蛋白,并分别与相应的弗氏佐剂等体积乳化,将20只6周龄大小的雌性Balb/c小鼠随机分成5组,分别免疫3种重组蛋白,同时设置疫苗组和PBS组作为对照组,并进行免疫评价,比较C末端连接的不同B细胞表位对Cap免疫原性的影响。抗体检测结果表明,除第2周外,各试验组的抗体水平均显著高于PBS组,且连接2个表位的Cap-e12蛋白产生的抗体水平高于只连接1个表位的蛋白(Cap-e1、Cap-e2),而在第6周时,Cap-e12蛋白抗体水平与疫苗组无显著差异。综上Cap的免疫原性与连接表位数量有关,连接2个表位后能显著提高Cap的免疫原性。
- 刘晴坤冯华任春晓魏蔷刘运超张改平
- 关键词：衣壳蛋白B细胞表位免疫原性
- 靶向鹅星状病毒Spike蛋白的抗病毒亲和肽及其应用
- 本发明涉及靶向鹅星状病毒Spike蛋白的抗病毒亲和肽及其应用，所述亲和肽的序列为WRCKVR、WKHKRR或WKHWYK。本发明通过分子对接虚拟筛选技术，以TAstV‑2Spike蛋白的晶体结构为模板，运用SWISS‑M...
- 金前跃张改平王方雨郭振华卢清侠邢广旭张桂悦魏蔷王丽柴书军邢云瑞
- 一种检测鸡减蛋综合征病毒的双抗体夹心ELISA试剂盒及其应用
- 本发明涉及一种检测鸡减蛋综合征病毒的双抗体夹心ELISA试剂盒及其应用。双抗体夹心ELISA试剂盒包括：包被有鼠抗EDSV Fiber蛋白单克隆抗体5G4的酶标板、HRP标记的鼠抗EDSV Fiber蛋白另一单克隆抗体6...
- 魏蔷张改平刘运超宋亚鹏柴书军
- 狂犬病病毒G蛋白的原核表达及反应原性分析被引量：5
- 2017年
- 为优化狂犬病病毒G蛋白的原核表达条件,探究其反应原性,参照狂犬病病毒CTN-1V10株编码G蛋白基因序列,采用生物工程合成的方法合成编码G蛋白的基因片段,并将该片段命名为G5F。将该片段与pET-28a原核表达载体连接,构建重组表达质粒pET-G5F,并将重组质粒进行诱导表达,在IPTG浓度为0.2 mmol/L、温度为20℃、诱导12 h时,重组蛋白表达量最高。SDS-PAGE电泳及Western blot分析表明,G5F重组蛋白可溶性表达量高,且可以被抗狂犬病病毒单克隆抗体识别,反应原性良好。
- 王攀刘运超魏蔷柴书军陈玉梅张改平
- 关键词：狂犬病病毒G蛋白可溶性表达反应原性
- 一种基于纤维蛋白建立的鸡减蛋综合征病毒抗体检测试纸及制备方法
- 本发明提供一种基于纤维蛋白建立的鸡减蛋综合征病毒抗体检测试纸及制备方法。所述试纸包括支撑底板和固定在支撑底板上的吸附层，吸附层从测试端开始依次为样品垫、金标蛋白垫、层析检测膜和吸水垫；其中金标蛋白垫由玻璃纤维棉包被，固定...
- 张改平宋亚鹏魏蔷孙亚宁杨继飞刘运超李新生
- 猪圆环病毒2型SYBRGreen Real-time qPCR检测方法的建立被引量：8
- 2018年
- 为了建立一种基于SYBRGreen的猪圆环病毒2型(PCV2)荧光定量PCR诊断方法,以PCV2 ORF2基因序列为研究对象,构建p MD19T-ORF2重组质粒作为阳性标准品,设计特异性引物,对该方法的最适引物浓度、退火进行了优化,并对该方法的灵敏度、特异性、可重复性以及临床样品检出率进行了评价。结果表明,该方法引物的最佳终浓度为0. 2 mol/L,最适退火温度为55℃;检测限可达到3. 0×10~2个拷贝/mL,而普通PCR检测限在3. 0×10~4个拷贝/mL;溶解曲线分析显示,在77~79℃有单一的溶解峰出现,并与CSFV、PPV、PRRSV、PRV没有交叉反应;组内重复性变异系数为0. 29%~0. 32%,组间变异系数为0. 32%~0. 36%;此外,该方法对临床样品的检出率为81. 5%(31/38),而常规PCR为68. 4%(26/38)。因此,相比常规PCR,该方法更为快速、灵敏、特异、稳定,更适合PCV2临床样品的检测,可为该PCV2早期感染的快速检测提供新方法。
- 冯华刘运超陈玉梅魏蔷张改平
- 关键词：猪圆环病毒2型PCV2ORF2REAL-TIME
- CCG-1423抑制猪流行性腹泻病毒体外感染的方法及应用
- 本发明涉及一种小分子抑制剂CCG‑1423抑制猪流行性腹泻病毒体外感染的方法及应用，该抑制剂可用于制备抑制猪流行性腹泻病毒感染的抗病毒药物。试验证明，在猪肾细胞LLC‑PK1体外感染PEDV过程中添加浓度为2μM的CCG...
- 魏蔷黄慧敏刘运超金前跃贾广敏张改平
- 新型SPF鸡隔离器
- 本实用新型涉及新型SPF鸡隔离器，包括下箱体、上箱体及支架，下箱体的内部设有水平转动的输送带，在输送带的一端部设有刮粪条，在刮粪条的下方还有与其对应的导流槽，导流槽的下端伸入出粪口内，上箱体上的排气箱体的最里端设有初效过...
- 柴书军刘运超罗俊杨苏珍李明王方雨冯华魏蔷张改平邓瑞广
- 文献传递
- 猪流行性腹泻病毒S1蛋白的免疫原性评估
- 2022年
- 为了评估猪流行性腹泻病毒(PEDV)S1蛋白的免疫原性,利用果蝇胚胎S2细胞表达重组S1蛋白,将纯化的S1蛋白免疫4周龄昆明小鼠,收集免疫血清及脾淋巴细胞,通过ELISA、病毒中和试验和流式细胞术等方法分析表达的重组S1蛋白的免疫原性。结果显示,与对照组(PBS)相比,重组PEDV S1蛋白免疫组小鼠血清中特异性IgG抗体水平显著提升;二免后14 d,果蝇细胞重组PEDV S1蛋白免疫组小鼠的中和抗体效价达到1∶320;免疫后小鼠脾脏淋巴细胞具有更强的增殖能力;外周血CD3^(+)T细胞百分比显著增加,CD4^(+)/CD8^(+)T细胞比值高于对照组;小鼠血清中IL-4、IFN-γ水平显著上升。综上,成功表达了重组PEDV S1蛋白,其可以诱导小鼠产生高效价的中和抗体,促进细胞免疫应答。
- 陈维聪刘运超周川杰杨苏珍魏蔷柴书军张改平
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S1蛋白免疫原性中和性抗体
- 猪细小病毒中和性单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2021年
- 为了制备具有中和活性的抗猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)单克隆抗体,采用血凝试验(HA)鉴定纯化的重组PPV VP2蛋白的活性,将重组VP2蛋白与弗氏佐剂混合后免疫BALB/c小鼠。免疫3次后,小鼠血清的血凝抑制(HI)效价可达1∶2^(16),取免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合制备杂交瘤细胞,采用有限稀释法进行多轮亚克隆,经免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)筛选,成功获得杂交瘤细胞株5F7和11B3,能够稳定分泌中和性单克隆抗体。单克隆抗体5F7和11B3的轻链型均为Kappa,重链型分别为IgG2a和IgG2b。经ELISA和IPMA检测,单克隆抗体5F7和11B3均能与重组PPV VP2蛋白和PPV病毒粒子发生特异反应,而与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)无交叉反应。5F7和11B3腹水针对PPV病毒反应的ELSIA效价分别为1∶10 240和1∶20 480;针对PPV感染PK15细胞的中和效价分别为1∶2^(11)和1∶2^(10)。Western blot鉴定结果显示,单克隆抗体5F7和11B3均不与变性的VP2蛋白发生反应,说明2株单克隆抗体均识别重组PPV VP2蛋白的构象型表位。综上,成功制备了2株具有中和活性的抗PPV单克隆抗体。
- 刘运超杨苏珍陈玉梅王聚财尚延丽魏蔷陈维聪冯华张改平
- 关键词：猪细小病毒VP2蛋白中和性单克隆抗体杂交瘤细胞株
