吴伟伟
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：苏州市第七人民医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Bcl-xL的基因克隆及其原核表达体系构建
- 2013年
- 目的克隆人Bcl-xL基因全长编码区,并利用载体pet28a在大肠埃希菌(ROS)原核表达人Bcl-xL蛋白,为探讨Bcl-xL与肿瘤的关系奠定基础。方法分离胃癌患者外周血单核细胞并提取总RNA;采用RT-PCR方法扩增Bcl-xL基因,构建重组表达质粒pet28a/Bcl-xL;酶切鉴定挑选阳性重组质粒转化大肠埃希菌ROS,测序鉴定后增菌培养,IPTG 25℃诱导6 h,SDS-PAGE电泳判断以包涵体形式存在的带有His标签的融合蛋白,进一步利用免疫印迹法鉴定。结果成功扩增获得Bcl-xL基因CDS区全长702 bp,与GenBank中发表的序列完全一致;成功构建了原核表达载体pet28a/Bcl-xL,并在工程菌ROS中获得大量表达。结论扩增获得人Bcl-xL基因,并成功原核表达获得人Bcl-xL融合蛋白,为进一步深入研究其生物学功能奠定了基础。
- 时振华赵健吴伟伟杜鸿
- 关键词：CDNA克隆原核表达
