纪晓宇 作品数:4 被引量:36 H指数:2 供职机构: 广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心 更多>> 发文基金: 广东省自然科学基金 广东省科技计划工业攻关项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 农业科学 更多>>
岗梅实时荧光定量PCR内参基因的筛选 被引量:3 2015年 为筛选适用于岗梅实时荧光定量PCR的内参基因。应用实时荧光定量PCR技术,分析18S r RNA(18S)、Actin(ACT)、α-tubulin(TUA)、β-tubulin(TUB)、Cyclophili(CYP)、Elongation factor 1-α(EF-1α)和Polyubiquitin(UBQ)共7个看家基因在岗梅的8个不同组织部位中的表达情况,并利用Ge Norm、Norm Finder和Best Keeper共3个软件对每个看家基因的表达稳定性进行评价。3个软件的分析结果均表明:18S、ACT和TUA看家基因的稳定性和相关性均较好,可在这3个看家基因中选择1个或以18S-ACT、18S-TUA组合作为岗梅基因研究的内参基因。 郑夏生 叶国兵 纪晓宇 温羚玲 徐晖 詹若挺 陈蔚文关键词:岗梅 Q RT-PCR 内参基因 蒲公英不同提取物对大肠杆菌体外抑菌活性的作用 被引量:31 2015年 【目的】考察蒲公英对大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)的体外抑制作用及其对E.coli蛋白质表达的影响。【方法】蒲公英药材粉末用水煎煮以及用不同极性溶剂(正己烷、乙酸乙酯、蒸馏水)依次进行提取,制成8种供试液。采用微量稀释法测定8种供试液对E.coli DH5α的抑菌活性,绘制E.coli在水煎液作用下的生长曲线;采用薄层色谱法(TLC)分析8种供试液的化学组成,通过十二烷基磺酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法和双向电泳(2-DE)法分析蒲公英对E.coli蛋白质表达的影响。【结果】蒲公英水煎液对E.coli有较强的抑菌活性,其最小抑菌浓度(MIC)为1.95 mg/m L;蒲公英乙酸乙酯相3对E.coli的MIC为0.13 mg/m L,相当于含19.23 mg/m L生药;正己烷、乙酸乙酯提取部位对E.coli没有明显的抑菌活性。TLC分析显示:正己烷和乙酸乙酯1不含绿原酸;乙酸乙酯相2、3部位斑点多且均明显。与空白组比较,蒲公英作用后E.coli生长受到抑制。SDS-PAGE和2-DE分析结果表明:蒲公英会影响E.coli的蛋白表达,其中2-DE分析结果显示乙酸乙酯相3的2×MIC作用大肠杆菌21 h后检测到的蛋白质点比空白对照图谱少92个,其中大肠杆菌可溶性蛋白表达量下调2倍的蛋白点有24个,上调2倍蛋白质点有19个,蒲公英乙酸乙酯相3作用于大肠杆菌后,大肠杆菌可溶性蛋白(p H3-10)表达量明显下调,蒲公英对大肠杆菌蛋白质表达具有抑制作用。【结论】蒲公英对E.coli的抑菌作用显著,绿原酸等水溶性成分的抑菌活性成分主要集中在水溶性部位,可通过影响细菌蛋白质的表达达到抑菌效果。 纪晓宇 彭苑霞 刘敏 徐晖 詹若挺关键词:体外抑菌 大肠杆菌 双向电泳 毛冬青三萜C-28位氧化酶基因的克隆与功能研究 2019年 目的对毛冬青三萜C-28位氧化酶基因进行挖掘与功能鉴定。方法在前期获得的毛冬青转录组数据中,筛选出1个可能参与毛冬青三萜C-28位氧化的CYP基因(IpAO1),将IpAO1与毛冬青三萜合酶IpAS1共转化酿酒酵母,验证IpAO1的功能。结果 Western Blot结果表明,重组酵母能够表达与预期大小相符的IpAS1蛋白和IpAO1蛋白。GC-MS分析结果显示,仅表达IpAS1基因的重组酵母产生了α-香树脂醇和β-香树脂醇,而共表达IpAS1和IpAO1基因的重组酵母合成了熊果酸和齐墩果酸。结论来源于毛冬青的IpAO1是编码一个α-香树脂醇/β-香树脂醇的C-28位氧化酶。 覃嘉良 贠小芸 纪晓宇 詹若挺 徐晖关键词:三萜 齐墩果酸 熊果酸 异源表达 岗梅磺酸基转移酶基因的克隆与体外表达 被引量:2 2019年 目的药用植物岗梅Ilex asprella含有多种活性磺化三萜类成分,克隆岗梅中的磺酸基转移酶编码(sulfotransferase,ST)基因,以了解其独特的磺化机制。方法利用RT-PCR技术,由岗梅叶片RNA扩增获得了2个可能的磺酸基转移酶基因IaST1和IaST2,利用生物信息学工具对其进行分析,并将其转化至大肠杆菌E. coli进行原核表达。结果序列分析显示,IaST1与IaST2各包含1个开放阅读框,分别长1002bp和993bp,编码333和330个氨基酸,理论相对分子质量为55500和54700。二者均具有ST的5个保守结构氨基酸序列,与黄顶菊Flaveriabidentis的黄酮醇C-3磺酸基转移酶亲缘关系较近。SDS-PAGE显示在E. coli中成功表达了IaST1和IaST2蛋白。结论首次从岗梅中克隆了ST基因,为后续阐明其功能及其在岗梅三萜磺化中的作用奠定了基础。 林青 小芸 官慧儿 纪晓宇 徐晖关键词:岗梅 基因克隆 体外表达