李懿
- 作品数：6 被引量：1H指数：1
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- pEZsiRNA6.1/hHif-1α稳定转染食管鳞癌EC-9706细胞系的建立
- 2012年
- 利用基因工程技术将合成的HIF-1αshRNA与pEZsiRNA6.1空载体连接,构建pEZsiR-NA6.1/hHif-1α载体,PCR和测序结果表明所构建的pEZsiRNA6.1/hHif-1α重组载体正确.进一步将所构建的载体转染人食管鳞癌EC-9706细胞系,利用G418筛选HIF-1α稳定干扰的细胞系,荧光显微镜检测结果表明:稳定转染pEZsiRNA6.1/hHif-1α的EC-9706细胞均有绿色荧光蛋白示踪.经CoCl2诱导模拟缺氧4h,Western Blot结果显示pEZsiRNA6.1/hHif-1α能有效抑制EC-9706缺氧食管癌细胞HIF-1α的诱导表达.
- 汲翔曹博金硕李军李懿范丹丹郭欢汲振余范天黎
- 关键词：HIF-1Α基因沉默光动力学疗法食管鳞癌
- 膜骨架蛋白4.1R对光动力效应的影响
- 目的 研究膜骨架蛋白4.1R对光动力(photodynamic therapy,PDT)效应的影响,为临床上光动力疗法治疗癌症提供更合理的个体治疗方案.方法 以野生型与4.1R基因敲除型小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)为研究...
- 范丹丹李建辉李懿宁姝威汲振余
- 膜骨架蛋白4.1N负调控乳腺癌细胞的粘附、迁移及侵袭
- 目的观察细胞膜骨架蛋白4.1N在乳腺癌细胞的粘附、迁移及侵袭中的作用。方法利用蛋白4.1N特异抗体,采用Westemblot和免疫组化技术检测4.1 R/G/N/B在不同转移能力的乳腺癌细胞系MCF-7(低转移)、T-4...
- 汲振余李懿范丹丹
- 靶向survivin基因小干扰RNA设计及鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的:利用生物信息学技术预测设计特异抑制survivin蛋白表达的siRNA序列,瞬时转染食道癌细胞KYSE-70,并观察对survivin蛋白表达的沉默效果。方法:依据NCBI数据库获得的survivin mRNA序列,利用Whitehouse,Sidirect和Rational SiRNA Design软件预测设计siRNA干扰序列,并利用BLAST分析干扰序列与人类全基因组的同源性;转染食管癌细胞KYSE-70,Western blot法鉴定蛋白表达。结果:初步预测出3条含21个核苷酸的survivin干扰序列,瞬时转染食道癌细胞KYSE-70后survivin蛋白表达明显下降。结论:运用生物信息学技术可快速便捷预测出抑制survivin表达的siRNA序列,为研究survivin在食管癌发生发展中的作用奠定了基础。
- 施佳辰李懿范丹丹李建辉安继辉汲振余
- 关键词：小干扰RNASURVIVIN基因食管癌
- 食管鳞癌细胞KYSE-70的分化诱导对光动力学应答敏感性的抑制
- 2011年
- 目的:研究全反式维甲酸(ATRA)对低分化食管鳞癌细胞系KYSE-70的分化诱导作用及对光动力学疗法(photodynamic therapy,PDT)的应答敏感程度.方法:以高分化食管鳞癌细胞KYSE-450和低分化食管鳞癌细胞KYSE-70为研究对象,用1μmol/LATRA为诱导剂,诱导KYSE-70细胞从低分化状态向高分化状态分化,通过细胞形态学、增殖实验来验证;细胞以1mmol/LALA处理,不同剂量的450nm蓝光照射,MTT法测定PDT对细胞的光毒毒性;流式细胞法测定PDT诱导的凋亡水平,Hoechst33342染色后观察凋亡细胞的胞核形态.结果:经ATRA处理后,诱导组与对照组相比,细胞变扁平、体积增大、胞质密度减低、核变大、核密度亦减低、细胞生长缓慢.高分化KYSE-450、分化诱导后的KYSE-70细胞和未诱导KYSE-70细胞用ALA处理后进行蓝光PDT,MTT结果显示高分化KYSE-450和分化诱导后KYSE-70的细胞存活率明显高于未诱导细胞,而高分化KYSE-450细胞敏感性略微低于分化诱导后的KYSE-70细胞.当光剂量为225mJ/cm2时,诱导前后细胞存活率分别为36.23%±7.43%和54.28%±3.64%,有极显著差异(P<0.001);分化诱导后的KYSE-70细胞凋亡率(18.1%)亦低于未诱导的细胞(33.3%).结论:经分化诱导后的食管鳞癌细胞PDT敏感性明显差于未诱导的食管鳞癌细胞,提示细胞分化诱导疗法不仅不能增强PDT效应,反而降低疗效;细胞分化诱导对PDT效果的影响部分通过抑制凋亡而实现.
- 孙蕾李懿石雨刘喜龙杨观瑞赵立群杨小静裘一兵张亚冰汲翔康巧珍汲振余
- 关键词：细胞分化光动力学疗法ALA
- 细胞膜骨架蛋白4.1R对光动力效应的影响
- 2014年
- 目的 探讨细胞膜骨架蛋白4.1R对光动力效应的影响.方法 将4.1R基因敲除型（4.1R-/-）和野生型（4.1R＋/＋）小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）分别以0.25、0.50、1.00、1.50、2.00mmol/L浓度的5-氨基乙酰丙酸（5-ALA）孵育,72、96、120、180、240mJ/cm2剂量的450 nm蓝光照射进行光动力处理,细胞增殖检测试剂盒（CCK-8）检测细胞存活率;经不同浓度5-ALA孵育的细胞,以荧光分光光度法检测胞内光敏剂原卟啉的荧光强度;以1.00 mmol/L的5-ALA孵育细胞后激光共聚焦显微镜观察胞内产生的原卟啉在细胞中的定位;Western印迹法检测原卟啉合成限速酶亚铁螯合酶（FECH）与胆色素原脱氨基酶（HMBS）蛋白表达水平.结果 5-ALA光动力处理均能杀伤两种细胞,其杀伤作用与5-ALA的浓度、孵育时间及光照射剂量相关,但两者PDT杀伤效果不同.当1.00mmol/L的5-ALA孵育4.0h且光照射剂量为120mJ/cm2时,4.1R-/-MEF存活率显著高于4.1R＋/＋MEF[（46.9±7.1）％比（12.5±2.1）％,P＜0.001].5-ALA孵育细胞后产生的原卟啉分布于整个胞质中,但两种细胞中原卟啉的浓度不同,在1.00 mmol/L的5-ALA孵育4.0h时,4.1R＋/＋MEF内原卟啉荧光值显著高于4.1R-/-MEF（124.2±3.5比34.6 ±3.8,P＜0.001）.Western印迹结果表明FECH与HMBS在两种细胞中的表达水平差异无统计学意义.结论 蛋白4.1R的缺失造成细胞内原卟啉合成量降低,PDT效果下降,但并未影响ALA代谢过程,推测蛋白4.1R影响了5-ALA的跨膜转运,进而影响细胞内原卟啉的合成,最终影响了PDT杀伤效应.
- 范丹丹李懿李建辉宁姝威禹丽娜张立果范天黎杨小静裘一兵康巧珍汲振余
- 关键词：光化学疗法成纤维细胞胚胎
