王继创
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：郑州大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 柯萨奇病毒 A 组16型衣壳蛋白 VP1的原核表达被引量：2
- 2014年
- 构建柯萨奇病毒A组16型(CVA16)衣壳蛋白VP1重组质粒pET-41a(+)/VP1,优化诱导表达条件,进行原核表达及蛋白纯化。通过PCR扩增获得VP1基因片段并转进大肠埃希菌E.coli BL21(DE3)内进行表达。从时间、温度、诱导剂浓度三个方面优化表达条件,收集表达菌体,经镍柱和DEAE柱纯化后,用蛋白印迹检测免疫反应性。结果表明,目的蛋白为包涵体,分子质量约为61ku,与设计蛋白分子质量大小相符,以诱导5h、IPTG的浓度为0.20mmoL/L、温度为37℃时蛋白表达量最高。纯化后蛋白纯度达到94%,蛋白印迹检测具有免疫反应性。试验成功获取了柯萨奇病毒A组16型(CVA16)VP1蛋白,且该蛋白具有免疫反应性。
- 王云龙米海李玉林王继创程蕾邓黎黎张春艳孙园园
- 关键词：柯萨奇病毒VP1基因原核表达蛋白纯化
- N端前脑钠肽稳定保存体系的优化被引量：1
- 2015年
- 目的:探讨血清中N端前脑钠肽(NT-proBNP)的最佳保存条件,为检测试剂盒提供性能稳定的检测参考品。方法:采用ELISA定量检测不同保存液中NT-proBNP含量的变化,单因素分析基础缓冲体系、防腐剂Proclin300及抗生素等成分对NT-proBNP保存的影响,再通过正交实验进行各因素的优化组合,确定最佳的NT-proBNP保存体系。结果:单因素确定NT-proBNP保存基础缓冲体系为0.02 mol/L pH7.2的PBS缓冲液;添加防腐剂Proclin300可使NT-proBNP在37℃中的保存时间延长1 d;选择联合添加青霉素、链霉素比各自单独添加延长NT-proBNP保存时间1 d。通过正交实验确定NT-proBNP保存液成分为0.02 mol/L pH7.2的PBS基础缓冲液配制的20%的小牛血清、1/1000的Proclin300、120 U/ml青霉素与80 U/ml链霉素,以此保存液保存NT-proBNP参考品7 d后标定的定值样本结果显示:37℃中与4℃中标定值相比仅降低了1.3%。结论:优化后的NT-proBNP血清保存液能在37℃条件下保存NT-proBNP参考品7 d。
- 王翠王云龙明亮郑配国谢南昌李玉林王继创
- 关键词：血清标本稳定性
- 人乳腺珠蛋白荧光免疫层析检测方法的建立被引量：3
- 2021年
- 目的:建立外周血中人乳腺珠蛋白(hMAM)荧光免疫层析快速定量检测方法。方法:采用双抗体夹心法制备免疫层析试纸条,并评价线性范围、精密性、特异性等性能指标。结果:实现了外周血中hMAM定量检测,线性范围0.312~20 ng/ml,批内变异系数均小于10%,批间变异系数均小于15%,平均回收率102.6%,与癌胚抗原(CEA)、癌抗原(CA153)无明显交叉反应,ELISA平行检测46例临床血清相关性良好。结论:建立了定量检测hMAM的时间分辨荧光免疫层析方法,为乳腺癌诊断和预后提供一种辅助检测手段。
- 崔云会陈楠陈楠王云龙李玉林明亮
- 关键词：人乳腺珠蛋白乳腺癌
