于忠杰
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- NNK联合LPS孵育对小鼠巨噬细胞增殖及相关基因表达影响
- 2015年
- 目的观察脂多糖（LPS）、4-（甲基亚硝氨基）-3-吡啶-1-丁酮（NNK）对小鼠巨噬细胞增殖及相关基因表达的影响。方法体外培养小鼠巨噬细胞Raw264.7细胞,检测不同浓度的LPS及NNK刺激后Raw264.7细胞C-myc mRNA的表达情况,选择药物最佳浓度。用所选浓度的LPS、NNK及LPS＋NNK孵育Raw264.7细胞不同时间,利用细胞计数仪检测细胞增殖能力,采用实时定量PCR方法检测C-myc、核转录因子-κB（NF-κB）、精氨酸酶（Arginase）、一氧化氮合酶（iNOS）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1α及IL-6mRNA表达,应用酶联免疫试剂盒检测炎性递质TNF-α及IL-6的含量。结果选择浓度为10μmol/L NNK与1mg/L LPS进一步实验。NNK孵育Raw264.7细胞24h,其细胞增殖和各基因表达及IL-6、TNF-α蛋白表达与对照组比较差异无显著性。LPS和LPS＋NNK孵育Raw264.7细胞24h,其细胞增殖活性显著降低;C-myc、NF-κB、Arginase、iNOS、IL-1α、IL-6mRNA及IL-6、TNF-α蛋白表达显著升高（F=19.4～5 895.0,t=4.04～97.53,P〈0.05）。NNK对LPS刺激的Raw264.7细胞C-myc mRNA、TNF-α蛋白的表达升高具有拮抗作用;对NF-κB、IL-1αmRNA的表达升高具有协同作用。结论 LPS可抑制Raw264.7细胞的增殖,并促进Raw264.7细胞活化;NNK单独孵育对巨噬细胞的增殖和相关基因表达无明显影响,但可以强化LPS诱导的NF-κB、IL-1α基因高表达,促使巨噬细胞向M1型活化。
- 陈琛卞晶晶刘晓萍张静于忠杰杨童茜
- 关键词：脂多糖类巨噬细胞
- 小鼠胚胎干细胞在同种正常肝脏中的定向分化被引量：1
- 2015年
- 目的研究小鼠胚胎干细胞在正常肝脏微环境中的迁移、分化及对正常肝组织的影响。方法分离小鼠生殖腺嵴获取胚胎干细胞,体外扩增、5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记后经尾静脉注入正常小鼠体内。于注射后2、4周取肝脏,连续冷冻切片,采用苏木精-伊红染色、免疫荧光双染色和PAS染色检测移植细胞在肝内的分布、清蛋白表达和糖原合成情况,显微计数分析肝细胞的增殖状态。结果移植2周,受体鼠肝脏内均可见散在分布的大而圆的BrdU和清蛋白双阳性细胞,PAS染色呈强阳性反应;体积小的BrdU阳性细胞,清蛋白表达呈阴性。移植4周,单位面积内BrdU阳性细胞数量较2周时减少,PAS着色较2周时浅,糖原颗粒细小、分布均匀,肝细胞的形态比较规则,但体积变大,胞核大而松散,单位面积的肝细胞数量较正常肝脏减少,肝小叶结构与正常鼠比较无显著改变。结论静脉移植的胚胎干细胞可以迁移至正常肝脏,在肝脏微环境中分化为肝细胞,并刺激正常肝细胞增殖。
- 刘倩于舒飞刘晓萍杨童茜于忠杰郭菲菲
- 关键词：胚胎干细胞细胞移植小鼠
- LPS和NNK对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及NF-κB、P-P38、CUGBP1蛋白表达的影响
- 2017年
- 目的观察炎性刺激因子脂多糖(LPS)、4-(甲基亚硝氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)及LPS联合NNK对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及核因子κB(NF-κB)、P-P38、CUGBP1蛋白表达的影响。方法应用全骨髓贴壁法体外培养纯化BMSCs。采用MTT法检测不同浓度的炎性因子对BMSCs增殖的影响,选择最佳刺激浓度。应用免疫细胞化学法检测炎性刺激对BMSCs中NF-κB、CUGBP1蛋白表达的影响,采用Western blot法检测炎性刺激对BMSCs中NF-κB、P-P38、CUGBP1蛋白表达的影响。结果不同浓度的炎性因子均能促进大鼠BMSCs增殖,其中以12.5 mg/L LPS、10 mg/L NNK、12.5 mg/L LPS联合10 mg/L NNK对大鼠BMSCs增殖的促进作用最为明显。免疫细胞化学法检测显示,炎性刺激后BMSCs中NF-κB、CUGBP1蛋白的表达量显著增加,差异有显著性(F=165.1~481.8,P<0.01)。Western blot法检测显示,炎性刺激后NF-κB、P-P38、CUGBP1蛋白的表达量增加,差异有统计学意义(F=38.1~1 531.0,P<0.01)。结论炎性因子可能通过激活P38MAPK和NF-κB信号途径促进大鼠BMSCs的增殖。长时间的炎性因子刺激,促进了NF-κB、P-P38、CUGBP1蛋白在细胞核中的表达。
- 姜莎莎王怡于忠杰荆昭刘晓萍狄元璞
- 关键词：脂多糖类NF-ΚBP38丝裂原活化蛋白激酶类
- 静脉移植BMSCs在急性肝损伤小鼠肝内的分布被引量：1
- 2015年
- 目的研究静脉移植的骨髓间充质干细胞(BMSCs)在急性肝损伤小鼠肝组织内的分布情况。方法雌性昆明种小鼠42只,随机分为正常对照组、损伤模型组和干细胞移植组。损伤模型组和干细胞移植组小鼠均以橄榄油配制的含体积分数0.4的CCl4一次性灌胃制备急性肝损伤模型。分离同种小鼠BMSCs,体外扩增、BrdU标记后经尾静脉移植于灌胃后24h的干细胞移植组小鼠体内。分别于CCl4灌胃后的第5、10、15天取损伤模型组和干细胞移植组小鼠的肝脏,每组每个时间点取材6只,正常对照组小鼠不做处理,直接取6只小鼠肝脏,各组均制备石蜡切片和连续冷冻切片,苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织的结构变化,免疫组织化学染色追踪BrdU阳性标记干细胞在肝组织内的迁移和分布情况。结果 HE染色结果显示,干细胞移植组小鼠在CCl4灌胃后的第5、10、15天的肝组织修复状态明显好于相同时间点的损伤模型组;干细胞移植组小鼠CCl4灌胃后的第15天肝组织接近正常。免疫组化结果显示,干细胞移植组小鼠在CCl4灌胃后第5天肝组织内散在分布着大量的黄色或褐色的BrdU阳性细胞胞核;干细胞移植组小鼠CCl4灌胃后第10天时肝组织内的BrdU阳性细胞胞核数目较第5天时少,而第15天时较第10天时明显减少,第15天与第5、10天比较,差异有显著性(t=3.350、2.907,P<0.05)。结论静脉移植的BMSCs可以迁移至急性肝损伤小鼠肝脏,并可促进损伤肝脏的修复;随着移植时间的延长单位面积内BrdU阳性细胞数量减少。
- 卞晶晶于忠杰杨童茜陈琛张克凌刘晓萍
- 关键词：骨髓祖代细胞小鼠
