李汉华
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：江苏大学基础医学与医学技术学院更多>>
- 发文基金：江苏省医学领军人才基金江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- hHGF腺病毒载体的构建及其在人脐带间质干细胞中的表达
- 2010年
- 目的:构建人重组肝细胞生长因子(human hepatocyte growth factor,hHGF)基因腺病毒载体(Ad-HGF),转染人脐带间质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hucMSCs),为转基因治疗提供实验基础。方法:设计含有SalⅠ及XbaⅠ酶切位点的引物,PCR扩增hHGF,将扩增产物克隆到带有绿色荧光蛋白(green fluorescenceprotein,GFP)标记的pAdTrack-CMV穿梭质粒上。重组穿梭质粒经PmeⅠ线性化后,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183中同源重组,筛选获得含有hHGF的重组腺病毒质粒,PCR、酶切鉴定并测序。重组病毒质粒用PacⅠ酶切线性化,脂质体转染293A细胞,经3轮扩增,制备高效表达的AdGFP/HGF,并转染hucMSCs。结果:重组腺病毒质粒经PCR和SalⅠ,XbaⅠ酶切鉴定,证实含有HGF基因,测序结果和设计片段的序列一致。荧光显微镜下发现293A细胞发光率几乎为100%,感染的hucMSCs亦可表达绿色荧光蛋白。结论:成功构建了hHGF腺病毒表达载体,并获得高滴度的病毒,能高效感染hucMSCs,为后续研究奠定了基础。
- 陈圆李汉华赵亚娟吴晓丹王梅许晓蒙谢颖许文荣
- 关键词：肝细胞生长因子人脐带间质干细胞腺病毒载体
