李立
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 突变型Cdh1基因真核表达质粒的构建及鉴定
- 2013年
- 背景:细胞周期末期促进复合物调节亚基Cdh1的活性受到磷酸化调节,磷酸化的Cdh1不能与细胞周期末期促进复合物结合,从而抑制细胞周期末期促进复合物的活性。目的:构建突变型Cdh1基因真核表达质粒及鉴定。方法:采用RT-PCR方法,从大鼠海马组织扩增出Cdh1基因编码序列。通过限制性内切酶EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切PCR回收产物和pBluescript质粒将Cdh1基因克隆到pBluescript质粒上。根据定点突变技术原理,以含Cdh1编码序列的pBluescript-Cdh1质粒为模版,针对Cdh1第40、151、163位丝氨酸(S)和第121位苏氨酸(T)设计4对突变引物,将4个氨基酸位点全部突变为丙氨酸(A)。最后通过测序鉴定。结果与结论:经电泳鉴定PCR扩增产物大小约为1500bp,包括Cdh1基因完整的编码序列、编码序列两端引入的酶切位点以及KOZAK序列,与预期相符。重组质粒pBluescript-Cdh1经EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切鉴定与预期结果符合。DNA测序比对发现Cdh1(BC162059.1)编码序列第930位碱基A在重组质粒pBluescript-Cdh1上突变为G,但氨基酸无变化,为同义突变,其他DNA序列无突变。经测序鉴定pBluescript-Cdh1-4A40、121、151、163突变质粒第40、121、151、163位氨基酸全部突变为丙氨酸。提示实验成功构建磷酸化位点突变型Cdh1基因真核表达质粒。
- 李立石小云张登文张传汉姚文龙
- 关键词：CDH1定点突变聚合酶联反应真核表达质粒神经损伤修复
