陈君
- 作品数：2 被引量：9H指数：2
- 供职机构：江西农业大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：江西省科技计划项目江西省教育厅科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 非洲猪瘟病毒p72重组蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立被引量：3
- 2023年
- 为了建立一种快速检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的方法,试验利用GenBank中ASFV的p72基因(登录号为MK128995.1)序列构建原核重组表达质粒pGEX-6P-1-p72和真核重组表达质粒pCAGGS-myc-p72,通过大肠杆菌原核表达系统获得p72重组蛋白,将其纯化后免疫小鼠,获得阳性杂交瘤细胞,通过Western-blot和间接免疫荧光鉴定筛选单克隆细胞株,并用单克隆抗体亚类鉴定试剂盒鉴定各单克隆抗体的亚型。通过对p72兔源多克隆抗体包被浓度及纯化的3株单克隆抗体稀释度进行优化,初步建立检测ASFV的双抗体夹心ELISA方法,并用该方法测试纯化的3株单克隆抗体分别与p72兔源多克隆抗体两两组合后所能检测的p72重组蛋白的灵敏度。结果表明:p72重组蛋白大小为99 ku;以纯化的原核表达的p72重组蛋白作为抗原免疫3只小鼠,抗体效价均大于1∶10 000;经细胞融合、克隆和筛选共获得5株阳性杂交瘤细胞,将其分泌的单克隆抗体分别命名为2C4C8、2C4B8、5C11F11、5C11D12、7D10C9,5株单克隆抗体与真核表达的p72重组蛋白均可发生特异性反应;单克隆抗体2C4B8和2C4C8的亚型为IgG1,5C11D12和5C11F11的亚型为IgG2b,7D10C9的亚型为IgG2a,轻链亚类均为κ;单克隆抗体2C4C8、5C11D12、7D10C9所能检测的p72重组蛋白最低浓度分别为0.25,0.25,0.05μg/mL。说明以纯化的3株单克隆抗体建立的双抗体夹心ELISA方法可用于检测p72重组蛋白抗原,且该检测方法有较好的灵敏度。
- 谢林梅唐子木钱新杰陈君邓浩东邹前萍朱世锋魏毓卿魏小冬花慧颖丁能水邬向东邬向东丁珍丁珍
- 关键词：非洲猪瘟病毒单克隆抗体双抗体夹心ELISA灵敏度
- 三种猪的肠道腹泻冠状病毒三重RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：6
- 2020年
- 为了同时检测引起猪只腹泻的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪丁型冠状病毒(Porcine deltacoronavirus, PDCoV)和猪急性腹泻冠状病毒(Swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADS-CoV)这三种主要肠道冠状病毒,试验设计3对特异性引物,建立PEDV、PDCoV和SADS-CoV的三重RT-PCR方法,同时进行特异性、敏感性、重复性试验,并检测临床样品对方法进行验证。结果表明:采用建立的三重RT-PCR方法对PEDV、PDCoV和SADS-CoV进行扩增,分别扩增出大小约为486 bp、329 bp和628 bp的特异性片段;该方法对猪瘟病毒、猪传染性肠胃炎病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒不能扩增出任何片段,特异性好;对PDCoV、PEDV和SADS-CoV的最低检测量分别为1×10^6,1×10^3,1×10^4 copies/μL,具有较好的敏感性;在196份临床样品中,PEDV的阳性检出率为13.27%,PDCoV为12.24%,SADS-CoV为0,同时多重RT-PCR与单项RT-PCR检测方法的符合率均为100%。说明建立的三重RT-PCR方法能够同时特异敏感、高效廉价检测出猪群中PDCoV、PEDV及SADS-CoV这三种肠道冠状病毒,具有快速、便捷和经济的特性,可用于临床大规模流行病学调查和诊断。
- 曾秀秀宋德平张帆帆张帆帆叶昱李凯吴琼叶昱于振兴丁珍陈君吴琼曾秀何后军唐玉新
- 关键词：猪流行性腹泻病毒腹泻
