黄美玲
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 供职机构：石河子大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目兵团博士基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 牛种布鲁氏菌2308紫外诱变株毒力检测及其对昆明系小鼠的免疫效果研究
- 2016年
- 为了检测牛种布鲁氏菌2308紫外诱变株毒力和免疫效果,本实验以S19疫苗株为对照,用牛种布鲁氏菌基因缺失株紫外线照射组(2308△rwbk A、2308△romp25和2308△rery)和非照射组(2308△wbk A、2308△omp25和2308△ery)分别侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7,对小鼠巨噬细胞内的细菌进行计数评价毒力致弱情况;用牛种布鲁氏菌基因缺失株紫外照射组、非照射组以及S19疫苗株分别以1×107CFU/0.2 m L免疫4-6周龄昆明系小鼠,通过ELISA检测小鼠血清中布鲁氏菌Ig G抗体和IFN-γ细胞因子,同时分离脾脏,CFU计数布鲁氏菌胞内菌数量;用2308强毒株以3×108CFU/0.2 m L腹腔感染各组免疫10周后小鼠,脾脏CFU评价各受试组小鼠的免疫效果。结果表明:在细胞水平,紫外线照射后的布鲁氏菌基因突变株其CFU较紫外线非照射组有不同程度的下降,统计学分析无显著性差异(P>0.05),但均高于S19胞内菌CFU;与S19疫苗株相比,2308△rwbk A和2308△rery紫外线照射组与其对应的2株紫外线非照射组在不同检测阶段,其Ig G和IFN-γ含量水平相当,但2308△romp25紫外线照射菌株组在第6、8周,其Ig G和IFN-γ含量均高于2308△omp25紫外线非照射菌株组和S19免疫组,统计学分析有显著性差异(0.01
- 张欢江雅丽刘丹黄美玲王杰王远志张辉陈创夫
- 关键词：紫外线毒力保护力
- 牛病毒性腹泻病毒E2抗原表位表达及验证被引量：2
- 2016年
- [目的]获得高效表达的重组牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhoea virus,BVDV)E2免疫抗原蛋白。[方法]应用软件分析BVDV-E2蛋白抗原表位,将富含抗原表位基因片段连接表达载体p GEX-4T-1,并转化至大肠杆菌(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot检测诱导表达蛋白,经镍柱分离纯化;以纯化蛋白为包被抗原,用间接ELISA检测抗原对免疫血清的反应性。[结果]成功克隆BVDV-E2抗原表位基因,并在大肠杆菌中高效表达,Western Blot和ELISA证实表达重组蛋白对BVDV阳性血清具有反应原性。[结论]获得大小为49.5 k Da的BVDV-E2抗原表位蛋白,并且该抗原稀释度在1:40,抗体稀释度在1:20时结合效果最佳。可用于后续的纳米抗体筛选的研究。
- 黄美玲吴鹏李天森张国奇杨霞陈创夫盛金良
- 关键词：抗原表位E2蛋白BLOT间接ELISA
- 绵羊肌肉生长抑制素(MSTN)双价纳米抗体构建与表达被引量：2
- 2016年
- 为了研究如何提高纳米抗体颉颃肌肉生长抑制素(MSTN)作用,试验采用构建绵羊MSTN纳米抗体双价表达载体的方法,将免疫双峰驼构建的MSTN特异性纳米抗体噬菌体文库筛选得到的特异性抗MSTN纳米抗体,扩增目的序列,利用linker进行链接,将序列构建到原核表达载体p ET-30a,转化进BL21(DE3),经过SDS-PAGE电泳以及Western-blot检测,利用Ni柱纯化双价抗MSTN蛋白纳米抗体。结果表明:经过诱导的表达菌,SDS-PAGE验证以及Western-blot检测,条带清晰。说明成功构建了颉颃MSTN的双价纳米抗体原核表达系统;通过纳米抗体技术制备MSTN的颉颃物,阻断其分子作用通路,可有效地促进绵羊肌肉的生长和发育。
- 吴鹏黄美玲李尤简张勋梁田肖媛媛陈新凯陈创夫盛金良
- 关键词：噬菌体文库蛋白纯化
- 牛病毒性腹泻病毒纳米抗体文库的构建与鉴定被引量：4
- 2015年
- 通过构建牛病毒性腹泻病毒(BVDV)驼源重链抗体文库,并鉴定抗体文库的多样性,为筛选抗BVDV特异性重链抗体奠定基础。利用灭活的BVDV免疫双峰驼,多次免疫后测定血清抗体滴度,采集免疫后的血液并分离其外周淋巴细胞,抽提RNA,用RT-PCR法扩增重链抗体可变区(VHH)片段;将其克隆至载体pCANTAB5E,电转大肠杆菌TG1获得VHH抗体基因库,检测抗体库库容量,随机挑取克隆测序验证抗体文库多样性。结果表明,所构建的抗体文库的库容量为4.32×105;测序和聚类分析表明,抗体文库多样性丰富。利用辅助噬菌体救援后,得到噬菌体展示文库,测定滴度达1.3×1012 cfu/mL。
- 张国奇李尤简肖红冉黄美玲杨霞陈创夫盛金良
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒单域抗体VHH
- 牛病毒性腹泻病毒E2蛋白纳米抗体的筛选
- 得高表达且特异性针对牛病毒性腹泻病毒E2主要抗原表位的纳米抗体,构建抗BVDV纳米抗体基因文库,并利用噬菌体展示技术从库中筛选出特异结合BVDV-E2的纳米抗体,为防治BVDV奠定基础. 本实验对已构建的文库库容量...
- 黄美玲吴鹏陈创夫盛金良
- 关键词：病毒性腹泻病毒E2蛋白基因筛选
