张英华
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：哈尔滨医科大学附属第一医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 高通量筛选天然产物中基质金属蛋白酶抑制剂
- 2015年
- 目的建立快速,高灵敏,小型化,自动化操作的分析技术,用于基质金属蛋白酶(MMPs)抑制剂的高通量筛选。方法实验以MMP2、MMP9作为模型酶,选择跟天然底物非常相似的无荧光合成肽底物(Mca-Pro-Leu-Gly^Leu-Dpa-Ala-Arg-NH2)。经MMP裂解生成荧光产物,通过荧光检测器检测水解反应速率。采用毛细管短端(出口端)进样酶、荧光底物和抑制剂。进样后反复交替加压电极,使其在柱内完全混合,反应并分离。结果柱内筛选技术只需要70 s即可完成毛细管内水解、分离、检测步骤,并且全自动。分析时间缩短了65%~70%,灵敏度增加了1.5~2倍。最后优化各个电泳参数,柱内酶反应最佳条件为:MMP溶液浓度20 nmol/L,荧光底物浓度10μL。每次分析所用MMP量大约为0.87fmol,底物为0.22 pmol。结论此技术节约人力及实验成本,更适合高通量筛选酶抑制剂,未来此柱内筛选法可应用于高通量筛选中药中可能存在的MMP抑制剂,为抗肿瘤药物的研发提供新的途径。
- 海洋张英华
- 关键词：基质金属蛋白酶抑制剂毛细管电泳荧光检测
