刘显林
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
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- 4种微孢子虫的分泌蛋白的比较基因组学分析被引量：4
- 2013年
- 微孢子虫营专性细胞内寄生,其分泌蛋白是一类重要的侵染互作因子。利用分泌蛋白预测程序EuSecPred 2.0对家蚕微孢子虫、中蜂微孢子虫、兔脑炎微孢子虫和毕氏肠道微孢子虫的分泌蛋白进行全基因组预测,分别获得了315、90、30和45个分泌蛋白。不同微孢子虫分泌蛋白的序列平均长度和氨基酸组成特征相似,信号肽和非信号肽区均以疏水性氨基酸为主;但统计所获蛋白质功能注释的分布却是大部分分泌蛋白为各种微孢子虫的特异蛋白,仅有少部分分泌蛋白为3种以上微孢子虫所共有,如几丁质脱乙酰基酶(CDA)、热激蛋白70(HSP70)、孢壁蛋白(SWP)和Ricin B-凝集素等。4种微孢子虫分泌蛋白信号肽区的基序分别为[LI]xx[IV]xAS、L[FY]x、[LI]LL[LI][GSA]L[VI][IS][CAG]和L[LF]LFLAISAGA[SA],非信号肽区域的基序分别为[LM][RK]N、L[RK][ND]、[KR][KR][KR]LP和[PG]D[LM]。研究结果有助于揭示微孢子虫的适应性进化机制,同时也为微孢子虫的侵染和与宿主互作机制的研究提供了靶标。
- 李田齐晓冉陶美林刘显林康定荣秦国伟潘国庆周泽扬
- 关键词：微孢子虫分泌蛋白比较基因组学信号肽基序
- 家蚕微孢子虫NbTom40的原核表达及定位
- 2013年
- 线粒体外膜易位酶是由Tom40基因编码的位于线粒体外膜上的转位酶复合体,能够将外界蛋白质转位运输到线粒体基质中.最近有研究称在一类仅具有简缩进化的线粒体——纺锤剩体的感染家蚕微孢子虫的基因组鉴定到一个NbTom40基因.本文首先通过克隆了长度为839bp的NbTom40基因,通过构建重组载体pET30a(+)-NbTom40,转入E.coli BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,经过HIS抗体的免疫印迹对表达的目的蛋白——31～43kDa间存在一条单一条带进行验证,结果显示该条带即为分子量大小正确的带有HIS标签的目的蛋白,然后将其进行Ni-NTA亲和层析以及聚丙烯酰胺凝胶纯化并制备多克隆抗体.NbTom40抗体与家蚕微孢子虫总蛋白的Western Blotting结果显示,在32kD处有明显杂交信号,与理论分子大小一致.最后,通过间接免疫荧光(IFA)对该基因编码的蛋白进行细胞定位,观察到NbTom40以散点状荧光信号分布在孢子内部.本研究为深入了解纺锤剩体的蛋白组成及其膜转运的分子机制奠定了分子生物学基础.
- 罗洁林立鹏潘国庆刘婷刘显林周泽扬
- 关键词：家蚕微孢子虫原核表达间接免疫荧光
- 家蚕微孢子虫全基因组分泌蛋白的预测分析被引量：5
- 2013年
- 分泌蛋白是一类重要的介导病原与宿主相互作用的因子。微孢子虫专性细胞内寄生的生活方式决定了分泌蛋白在其侵染、增殖、防御和调控宿主生理活动中具有重要的作用。利用真核生物分泌蛋白预测流程EuSecPred 1.0对家蚕微孢子虫全基因组的分泌蛋白基因进行预测和严格条件筛选,鉴定获得97个分泌蛋白基因,占基因组全部编码基因的1.87%。对分泌蛋白的功能和结构域进行注释分析,发现了孢壁蛋白、丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpin)和Ricin B-凝集素等重要侵染相关因子。氨基酸组成分析表明,家蚕微孢子虫分泌蛋白及其信号肽主要由疏水性氨基酸组成,而信号肽剪切位点主要由亲水性氨基酸组成。基序分析发现,分泌蛋白信号肽中存在保守基序T[ILV][IVL][LI][VIL][LI]LS[IV]I[AK][SA],分泌蛋白内部存在[ES]W[VLM]K和YF[FY][DG]L 2种基序。在全基因组范围对家蚕微孢子虫的分泌蛋白进行预测分析,有助于进一步研究家蚕微孢子虫致病相关的候选因子。
- 李田刘显林韩冰齐晓冉康定荣秦国伟党晓群潘国庆周泽扬
- 关键词：家蚕微孢子虫基因组分泌蛋白信号肽基序
