王泰鑫
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 发文基金：台州市科技局资助项目浙江省自然科学基金浙江省科技厅项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 丙型肝炎预防性疫苗的实验研究
- 2011年
- 目的以截短型乙肝核心抗原基因(SHBc 1-144aa)为载体进行HCV预防性疫苗的实验性研究。方法首先,体外合成的方式分别合成带有HCV B表位(1384-1405aa)及不具有该表位的的截短型1-144位HBc基因SHBc-B和SHBc,并将其与质粒pcDNA3.1进行基因重组,构建成质粒pcDNA3.1-SHBc-B和pcDNA3.1-SHBc。其后,以GFP为报告基因,构建真核表达质粒pcDNA3.1-SHBc-GFP,转染Hela细胞,共聚焦显微镜观察GFP表达情况,从而分析SHBc作为疫苗表达载体的可行性。最后,将pcDNA3.1-SHBc-B在JM109中进行表达,蔗糖不连续密度梯度离心提取纯化表达产物SHBcAg-B,该蛋白以pcDNA3.1-SHBc表达产物SHBcAg作对照,免疫Balb/C鼠。适时进行脾及外周血中T细胞亚群检测(FACS)、淋巴细胞胞内IL-4和IFN-γ检测(FACS),以观察SHBcAg-B的免疫原性。结果共聚焦显微镜观察到GFP的成功表达;SHBcAg-B免疫组小鼠胞内IL-4高于对照组,流式散点图亦显示SHBcAg-B免疫组小鼠血和脾中CD4^+细胞所占比例明显增高,SHBcAg-B免疫组胞内IFN-γ的值则正相反。结论 SHBcAg可作为疫苗的免疫载体,重组蛋白SHBcAg-B诱导出高水平的体液免疫应答,可作为HCV预防性疫苗的候选。本实验为HCV预防性疫苗的研制奠定了基础。
- 张丽萍孙明月王泰鑫梁津逍林平
- 关键词：预防性疫苗体液免疫
- ECRG4蛋白与细胞膜上胆固醇之间的相关性研究
- 2013年
- 目的探讨ECRG4在脂筏中分布及与细胞膜胆固醇含量的相关性。方法通过RT-PCR及Westernblot鉴定ECRG4阳性表达细胞株,用甲基-β-环糊精去除细胞膜上的胆固醇,超速离心的方法分离细胞膜,Western blot检测ECRG4蛋白含量变化。密度梯度离心制备脂筏,通过Western blot检测ECRG4蛋白水平。结果ECRG4在DU4475细胞中高表达,降低细胞膜上胆固醇后,ECRG4水平未发生明显变化;同时Western blot结果证实ECRG4未分布于脂筏。结论 ECRG4蛋白未定位于脂筏,且与细胞膜胆固醇之间无相关性。
- 陈佳玉张宇王泰鑫张丽婷
- 关键词：胆固醇脂筏
- HCV发夹状siRNA表达质粒的构建及作用研究被引量：1
- 2013年
- 目的建立HCV感染动物模型,并对HCV进行RNA干涉。方法制备HCV感染的HepG2细胞,RT-PCR法鉴定后腋下注射裸鼠,免疫组化法检测瘤组织内HCV NS3表达情况。制备带绿色荧光蛋白(GFP)的HCVsiRNA表达质粒,转染HepG2细胞,观察GFP表达情况。将此质粒注射模型小鼠,取瘤组织,RT-PCR及免疫组化法对其进行检测。结果在HCV感染的裸鼠实体瘤中检测到HCV NS3蛋白的稳定表达。成功构建了HCV发夹siRNA表达质粒,该质粒转染细胞后能够在其内正确表达。将该质粒尾静脉注射HCV感染的模型小鼠,注射4d后瘤组织内HCV NS3抗原阳性细胞阴转。结论成功建立了HCV感染的裸鼠模型,构建了HCV发夹siRNA表达质粒,该质粒能成功地干涉模型小鼠中的HCV。
- 陈佳玉戚永孝王泰鑫张丽婷林平
- 关键词：丙型肝炎病毒RNA干涉
