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顾洪

作品数：1 被引量：1H指数：1
供职机构：泸州医学院更多>>
发文基金：四川省教育厅自然科学科研项目国家自然科学基金更多>>
相关领域：生物学更多>>

合作作者

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇生物学

主题

  • 1篇质粒
  • 1篇质粒构建
  • 1篇转录
  • 1篇转录激活
  • 1篇转录激活因子
  • 1篇效应物
  • 1篇活性鉴定
  • 1篇激活素
  • 1篇TALEN

机构

  • 1篇电子科技大学
  • 1篇泸州医学院

作者

  • 1篇周红
  • 1篇曾凡才
  • 1篇顾洪
  • 1篇王轲

传媒

  • 1篇生物技术通报

年份

  • 1篇2014
共 1 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
针对ALK4基因的TALEN质粒构建与活性鉴定被引量：1
2014年
旨在利用类转录激活因子效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALEN)技术构建具有活性的敲除类激活素激酶受体4(Activin receptor-like kinase 4,ALK4)的TALEN质粒。利用TALEN在线设计工具,根据TALEN设计原则和ALK4剪接异构体的共同序列确定基因敲除的靶位点、TALEN识别序列和用于活性验证的限制性酶切位点。利用质粒文库试剂盒快速构建TALEN质粒,并通过酶切、测序和BLAST比对加以验证。应用脂质体转染法将构建质粒导入HEK293T细胞,通过共转染的pEGFP-N1质粒判断转染效率。利用嘌呤霉素进行阳性筛选后提取基因组DNA,PCR扩增靶序列,HhaⅠ酶切纯化后的PCR产物。结果显示,来自转染TALEN质粒细胞基因组的PCR产物的酶切效率明显下降,提示部分细胞的ALK4基因发生了突变。首次成功构建了在HEK293T细胞中有活性的TALEN质粒。
曾凡才顾洪王轲周红
关键词：质粒构建
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