刘捷
- 作品数：8 被引量：12H指数：2
- 供职机构：南京军区南京总医院更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 两株小鼠诺如病毒的分离与鉴定被引量：2
- 2016年
- 目的了解江苏地区常用实验小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的感染情况及进化特征。方法在江苏地区抽取三个实验动物中心的实验小鼠,采集直肠及内容物样本,应用RT-PCR方法检测MNV ORF2特异性基因(547bp,MNV nt5104-5650)。阳性样本经RAW264.7细胞分离病毒,对MNV分离株的VP1基因进行扩增,将其连接在p EASY-Blunt载体上,转化至大肠杆菌Trans1-T1感受态细胞,通过Kanamycin抗性筛选,挑取菌落进行PCR鉴定,鉴定为阳性的克隆送检测定其VP1基因序列,构建系统发生进化树。结果共检测小鼠直肠内容物30份,检出MNV阳性样本4份,包括ICR小鼠(2/8)、BALB/c小鼠(1/12)和C57BL/6J小鼠(1/10),感染率为13.3%;RAW264.7细胞接毒盲传三代,两只ICR小鼠样品接种的细胞产生明显细胞病变(CPE),表现为细胞圆缩聚集,大部分脱落死亡,而C57BL/6J和BALB/c小鼠样本接种RAW264.7细胞无CPE;应用VP1特异引物经RT-PCR检测,表现CPE的细胞样本出现特异条带,测序结果显示分离到的2株MNVVP1核酸序列均为1626bp,与引物设计参考毒株S7-P2(Gen Bank登录号:AB435514)VP1基因大小相同,进化树图表显示检测到的2株MNV属同一独立小分支与参考株BJ10-2062、CR4最为相近。结论此次抽检的实验小鼠MNV感染率为13.3%(4/30),考虑可能在同一设施内传播。常用实验小鼠携带病毒的生物学意义有待进一步研究。
- 马畅张旭亮刘捷恽时锋
- 关键词：诺如病毒小鼠病毒分离
- Hsp90促进PCV2在猪肾细胞系PK-15中的复制
- 引言猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)等症状的重要病原体,严重影响猪体健康、干扰实验研究,并给各国养猪业造成了巨大的经济损失。一些病毒...
- 刘捷张旭亮马畅尤金炜董敏陈莉恽时锋
- 文献传递
- 先天性白内障大鼠的血压与体温基础数据分析被引量：1
- 2016年
- 目的为了完善先天性白内障大鼠的背景资料,对该大鼠的血压与体重及体温进行了测定,并进行相关性分析。方法分别取三个体重段的正常睑裂白内障大鼠、小眼白内障大鼠和正常对照SD大鼠各30只,雌雄各半,用多道生理信号采集系统进行实验。结果三个体重段雌雄大鼠的血压间无统计学意义(P>0.05),但随着体重的增加,血压与体重之间逐渐形成相关关系;同品系雄性大鼠标准体重与老龄大鼠血压间有统计学意义(P<0.01)。各体重段雌雄大鼠体温有统计学意义(P<0.01),且雄性体温均低于雌性。结论白内障大鼠的血压、体重和体温的变化符合大鼠的生理特性,为今后该鼠的使用提供理论基础。
- 田小芸尤金炜董敏方天刘捷恽时锋
- 关键词：先天性白内障血压体温
- 鼠诺如病毒VP1蛋白病毒样颗粒表达、纯化及多克隆抗体制备
- 本发明公开了鼠诺如病毒VP1蛋白病毒样颗粒表达、纯化及多克隆抗体制备，本发明首次对鼠诺如病毒的结构蛋白VP1基因进行密码子优化，并利用杆状病毒表达系统表达蛋白，并使表达的蛋白形成病毒样颗粒，该抗原能够模拟活病毒的衣壳蛋白...
- 刘捷恽时锋马畅张旭亮尤金炜董敏陈莉
- 文献传递
- 旋毛虫烯醇化酶基因的克隆、原核表达及真核表达质粒的构建
- 目的 为了探究烯醇化酶对旋毛虫的感染是否具有免疫保护作用.方法 根据GenBank中发表的旋毛虫肌幼虫ENO基因序列(AF363629.1)设计引物,以旋毛虫肌幼虫总RNA为模板,通过RT-PCR扩增出了肌幼虫的Tsen...
- 张旭亮尤金炜刘捷马畅恽时锋严若峰
- 关键词：旋毛虫ENO原核表达PVAX1
- 制动致福利损伤大鼠肝细胞中NF-κB的表达被引量：5
- 2015年
- 目的研究制动导致的福利损伤大鼠肝细胞内NF-κB的表达变化。方法选取±170 g SD大鼠,雌雄各半,使用制动的方式造成其福利损伤,记录实验过程中的体增重和饲料消耗,而后分别使用实时定量PCR和免疫印迹法检测大鼠肝细胞内NF-κB p65的mRNA量和蛋白表达水平。结果与对照组相比,制动组大鼠的体增重和饲料能耗比均降低,且差异极显著(P<0.01);肝细胞中NF-κB p65的mRNA量和蛋白表达水平均大幅提升,同样差异极显著(P<0.01)。其中制动组雄性大鼠的NF-κB p65的mRNA量和蛋白表达水平显著高于雌性(P<0.05),但对照组大鼠的雄性与雌性之间未表现出差异(P>0.05)。结论大鼠福利受损时,肝细胞中NF-κB表达水平大幅提升,提示两者之间存在一定关联,表明NF-κB参与了大鼠福利损伤过程。
- 梁磊马畅刘捷董敏方天胡文娟陈莉贾春梅恽时锋
- 关键词：NF-ΚB基因表达
- 实验应激致小鼠福利受损及音乐干预的效果被引量：3
- 2015年
- 目的探究常规实验操作对动物福利的损伤程度以及音乐干预的效果。方法采用3周龄雄性ICR小鼠,实验操作组分别给予保定(E-r)、灌胃(E-g)、腹腔注射(E-p)和眼眶静脉丛采血(E-o)处理,音乐干预组采取相同处理后给予1h音乐干预(M-r,M-g,M-p,M-o)。连续处理7 d后,测定与福利相关的神经内分泌、免疫、生化、生长指标和饲料能效比。结果 1与对照组相比,实验操作四组体增重和饲料能效比均显著降低;E-r组TG、HDL-C、WBC、IL-2、β-EP和脾脏、胸腺指数均显著降低,CORT、ACTH、EPI显著升高;E-g组的TG、WBC、IL-2和β-EP显著降低,CORT、ACTH和EPI显著升高;E-p组IL-2显著降低,CORT、ACTH和EPI显著升高;E-o组脾脏指数和WBC显著降低,CORT显著升高。2与实验操作组相比,M-r组体增重、饲料能效比、脾脏指数、IL-2显著升高,CHOL、CORT、ACTH和β-EP均显著降低;M-g组WBC显著升高,CORT显著降低;M-p组WBC显著降低;M-o组饲料能效比显著升高。结论四种常规实验操作均对小鼠的健康福利造成了不同程度损伤,而音乐干预能够改善小鼠的操作应激和福利损伤程度。
- 马畅梁磊张旭亮尤金炜刘捷恽时锋
- 关键词：小鼠音乐
- 小鼠诺如病毒巢式RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：1
- 2017年
- 本研究旨在利用巢式RT-PCR技术,建立高效检测小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的方法。通过Gen Bank上公布的一系列小鼠诺如病毒的基因序列,设计内、外各一对特异性引物,通过优化PCR反应条件,建立巢式RT-PCR检测方法,并对临床样品进行检测。结果显示,本研究建立的巢式PCR检测方法特异性好,最低检出量为1×102copies/L,高于使用参考引物RT-PCR的最低检出量1×105 copies/L,对临床样品检出率为73%,高于使用参考引物普通RT-PCR的检出率(60%),与RT-qPCR方法检出率一致。结果表明,本研究成功建立了一种检测小鼠诺如病毒的巢式RT-PCR方法,并能快速、高效地应用于临床样品的检测,为小鼠诺如病毒的诊断和检测提供了有力的手段。
- 张旭亮马畅刘捷尤金炜刘彪恽时锋
- 关键词：巢式RT-PCR敏感性
