- 筛选和鉴定抗卵巢癌活性六肽的靶点蛋白
- 2014年
- 目的采用pull-down技术筛选乳源抗癌六肽(PGPIPN)在人卵巢癌细胞株(SKOV3)上的靶点蛋白(受体)并进行鉴定。方法以PGPIPN的序列为参照,设计出PGPIPN基因,以BamHⅠ/XhoⅠ为酶切位点,将PGPIPN基因构建到表达质粒载体pGEX-4T-1中,转化到E.coli BL21中,用诱导剂异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)低温诱导表达的谷胱甘肽S转移酶(GST)标签融合蛋白作为诱饵蛋白;从SKOV3中提取的总蛋白作为捕获蛋白,运用GST pulldown技术,筛选出靶点蛋白质,运用SDS-PAGE电泳进行初步鉴定,并用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的PGPIPN孵育鉴定。结果 SDS-PAGE电泳中有两条条带,一条为诱饵蛋白,一条为目的条带,在免疫荧光显微镜下观察到荧光PGPIPN结合到该条带上。结论筛选和鉴定了PGPIPN作用于卵巢癌细胞上的靶蛋白,为研究其抗癌的作用机制及其信号转导通路奠定了基础。
- 李小勤唐宜桂刘琛雷婷秦宜德
- 关键词：GST诱饵蛋白
- RNA干扰ERCC1基因表达对人卵巢癌耐药细胞DDP、PGPIPN敏感性的影响被引量：4
- 2015年
- 目的探讨RNA干扰核苷酸剪切修复偶联因子1(ERCC1)基因表达对人卵巢癌耐药细胞DDP、PGPIPN敏感性的影响。方法实验分为空白对照组、特异性转染组和非特异性转染组。采用MTT法测定PGPIPN、DDP对3组细胞的增殖抑制率,RT-PCR法检测PGPIPN对3组细胞乳腺癌易感基因1(BRCA1)基因表达的影响。结果 MTT法结果显示,PGPIPN作用人卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP 48 h,对其增殖有一定的抑制作用,在浓度为40、60 mg/L时,与浓度为0 mg/L比较,差异有统计学意义(P<0.05);DDP、PGPIPN分别作用特异性转染组细胞48 h,其增殖明显受到抑制,与0 mg/L比较,差异均有统计学意义(P<0.05);RTPCR法结果显示,PGPIPN作用特异性转染组细胞48 h,其BRCA1基因表达随着PGPIPN浓度升高而明显降低,在浓度为40、60 mg/L时,与PGPIPN浓度为0 mg/L比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 PGPIPN对SKOV3/DDP细胞的增殖有一定的抑制作用,并且通过干扰ERCC1基因表达可以明显增强SKOV3/DDP细胞对DDP、PGPIPN的敏感性,同时可增强PGPIPN对BRCA1基因的下调水平。
- 雷婷秦宜德刘琛周娟赵梦静
- 关键词：RNA干扰ERCC1卵巢癌DDP
- 乳源免疫调节肽对酒精诱导性肝细胞损伤的干预机制
- 2015年
- 目的研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)对肝细胞酒精性脂肪变性的干预机制。方法 MTT法筛选正常肝细胞株(LO2)酒精诱导的最佳浓度和PGPIPN最佳用药范围,在肝细胞内加入酒精和不同浓度的PGPIPN进行干预,连续造模3个月,建立能稳定遗传的酒精诱导脂肪变性的肝细胞模型,观察PGPIPN对肝细胞脂肪变性的防治效果。油红O染色法观察LO2细胞脂肪变性程度,RT-PCR法检测脂肪合成相关基因(ACC、PPAR-γ)的表达。结果成功建立了能稳定遗传的酒精诱导脂肪变性的肝细胞模型,并筛选出酒精诱导LO2脂肪变性的最佳浓度和PGPIPN最佳用药范围。PGPIPN可以防治和缓解脂肪变性,PGPIPN可能通过降低ACC的基因表达,升高PPAR-γ的基因表达来实现。结论 PGPIPN可防治和放缓肝细胞酒精性脂肪病变,机制可能是减少脂肪合成。
- 刘琛雷婷周娟赵梦静秦宜德
- 关键词：脂肪变性脂肪合成
- 乳源抗菌-免疫调节融合肽对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响
- 2014年
- 目的研究乳源抗菌-免疫调节融合肽(AIFP)对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响。方法采用MTT法测定AIFP对卵巢癌细胞株SKOV3细胞和原代培养的卵巢癌细胞增殖的影响;流式细胞术测定AIFP对SKOV3细胞和原代卵巢癌细胞凋亡、周期的影响;并用RT-PCR检测AIFP对SKOV3细胞及原代癌细胞凋亡和周期相关基因表达水平的影响,以探讨其可能机制。结果 MTT法显示,AIFP对卵巢癌细胞的增殖具有抑制作用,且具有时间和剂量依赖性,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。流式细胞术检测结果显示,AIFP诱导卵巢癌细胞的凋亡,具有剂量和时间依赖性,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。RT-PCR结果表明,AIFP可以影响细胞凋亡和细胞周期相关基因(Akt、CDC25C和cyclinB1)的表达。结论 AIFP上调卵巢癌细胞凋亡和周期相关基因Akt、CDC25C和cyclinB1的表达,对卵巢癌细胞株SKOV3具有抑制增殖和促进凋亡的作用。
- 唐宜桂李小勤刘琛雷婷秦宜德
- 关键词：SKOV3增殖凋亡
