王海峰
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：华南理工大学生物科学与工程学院更多>>
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- 人BCRP高效稳定表达COS-7细胞系的建立及其药物外排活性鉴定
- 2014年
- 目的建立乳腺癌耐药蛋白BCRP高效稳定表达COS-7细胞系,为相关药物的药物转运及其耐药性研究奠定基础。方法采用RT-PCR技术从MCF-7/ADR乳腺癌细胞中扩增出乳腺癌耐药蛋白基因BCRP的cDNA序列,插入真核表达载体pcDNA3.1(+),获重组质粒pcDNA3.1(+)-BCRP,将重组质粒pcDNA3.1(+)-BCRP转染COS-7细胞,经G418筛选后获得抗性细胞克隆。运用基因组PCR、SDSPAGE鉴定抗性细胞中外源BCRP基因的整合及表达,并以BCRP底物mitoxantrone对鉴定阳性的细胞克隆进行转运活性验证。结果成功克隆BCRP的cDNA并构建真核细胞表达载体pcDNA3.1(+)-BCRP。转染COS-7细胞后获得抗性克隆10个,PCR鉴定阳性有4个,其中2个克隆能高效表达BCRP蛋白。经活性验证,2个高表达的细胞克隆中有一个能显著高效外排BCRP底物mitoxantrone,显示良好的生物活性功能。结论成功建立一株BCRP高效稳定表达的COS-7细胞系,且具有特异性生物活性,可用于BCRP相关药物转运及耐药性研究。
- 张辉贾英王珍玉邓继峰王海峰戴仁科黄黎珍
- 关键词：乳腺癌耐药蛋白药物转运COS-7
