马晓军
- 作品数：1 被引量：4H指数：1
- 供职机构：宁夏医科大学总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小干扰RNA沉默TNF-α表达并抑制骨溶解的实验研究被引量：4
- 2013年
- 目的通过构建沉默TNF-α的重组腺病毒并观察其对小鼠假体骨溶解模型的影响,探讨基因治疗人工关节假体周围骨溶解的可能性。方法设计沉默TNF-α的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)编码序列的引物,扩增后利用RAPAD腺病毒包装系统将该序列载入腺病毒,并构建出E1、E3区双缺失的重组腺病毒Ad5-TNF-α-siRNA-CMVeGFP。取8～10周龄SPF级BABL/C雌性小鼠64只,体重20～25 g,随机分为4组(n=16)。空白对照组(A组)制备假体模型,颗粒对照组(B组)、空病毒组(C组)、治疗组(D组)制备假体松动骨溶解模型;造模第2周开始向关节腔内分别注入以下溶液(两次各注射40μL):A组注入PBS溶液,24 h后再次注入;B、C、D组注入钛颗粒悬浊液,24 h后分别注入PBS溶液、腺病毒Ad5 E1-CMVeGFP溶液(1×109PFU/mL)、重组腺病毒Ad5-TNF-α-siRNA-CMVeGFP溶液(1×109PFU/mL);每隔2周重复1次至第10周。术后观察小鼠一般情况,术后12周取材进行组织学观察及Westernblot检测TNF-α表达。结果目的基因载入腺病毒载体后经双切酶鉴定及DNA测序确定获得阳性克隆,重组腺病毒Ad5-TNF-α-siRNA-CMVeGFP成功转染HEK293细胞。术后各组小鼠均存活至实验完成。组织学观察示,A组炎性细胞及破骨细胞少,骨质形成良好;B、C组见大量炎性细胞浸润,破骨细胞多,骨质破坏明显;D组少量炎性细胞浸润,破骨细胞较B、C组少,未出现明显骨质破坏。各组界膜厚度及破骨细胞计数均为A组
- 余博郝绍文孙首选郭浩辉杨小春马晓军金群华
- 关键词：关节置换骨溶解TNF-Α小干扰RNA
