王黎
- 作品数：1 被引量：4H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院毒物药物研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 依赖于靶点稳定性的药物亲和反应实验条件探索被引量：4
- 2016年
- 目的对依赖于靶点稳定性的药物亲和反应（DARTS）这一靶标发现新技术进行主要影响因素的探索,获得DARTS更适宜的实验条件。方法采用不同浓度的链霉蛋白酶（酶与蛋白质量比1∶100~1∶10 000）对Jurkat细胞提取的蛋白混合物进行室温酶解,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和考马斯亮蓝染色,观察不同浓度链霉蛋白酶对蛋白混合物酶解的程度,以确定DARTS适宜的酶解浓度范围。在此基础上,以α-酮戊二酸为研究对象,采用DARTS联合SDS-PAGE,考察不同链霉蛋白酶浓度（酶与蛋白质量比为1∶500~1∶5000）和不同酶解时长（5~30 min）对DARTS结果的影响,获得适宜的酶解条件。选用靶标已知的麦考酚酸,采用上述实验所得的最适酶解条件进行DARTS,验证其可行性。结果采用不同浓度链酶蛋白酶对蛋白混合物进行酶解时,浓度为1∶100的条件下蛋白完全被水解,酶浓度为1∶10 000对蛋白混合物无明显水解,酶浓度为1∶500~1∶5000较温和,约可水解蛋白混合物的30%~60%。链霉蛋白酶浓度为1∶1000时,α-酮戊二酸的DARTS中受保护的蛋白条带呈现效果最好;在该酶浓度条件下,适宜的酶解时长为15 min。将以上酶解条件（链霉蛋白酶浓度1∶1000、酶解15 min）运用于麦考酸的DARTS,在4~7×10~4处可见明显的保护条带,Western免疫印迹法验证结果显示,保护条带中含有麦考酚酸靶蛋白IMPDH 1。结论以α-酮戊二酸为研究对象,获得了蛋白混合物DARTS更适宜的实验条件。
- 王黎肖智勇周文霞谢剑炜张永祥
