李秀娟
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
- 供职机构：大连海洋大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省教育厅高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 盐藻丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因DsSTPK的克隆、原核表达及纯化被引量：7
- 2014年
- 前期研究表明,盐藻丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶DsSTPK在转录水平上的表达受盐胁迫诱导。为了进一步研究该蛋白激酶的生理功能,通过RT-PCR扩增DsSTPK的开放阅读框,并将其克隆至pET32a(+)载体,得到重组表达载体pET32a(+)-DsSTPK。将重组表达载体转化E.coli.BL21(DE3),IPTG诱导表达,然后对融合蛋白进行表达形式分析,利用His60 Ni离子重力柱进行纯化,所得产物进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定。本研究成功构建了重组表达载体pET32a(+)-DsSTPK,经IPTG诱导后表达出的融合蛋白的分子量与预期相符;表达形式分析显示该融合蛋白在上清和包涵体中均存在;将上清蛋白纯化后获得了纯度较高的融合蛋白;Western-blot检测显示该融合蛋白能被抗组氨酸抗体特异性识别,具有良好的免疫学活性。DsSTPK的成功表达、纯化,为下一步制备抗体,然后进一步在蛋白质水平上研究其在盐藻耐盐机制中的作用奠定了基础。
- 陶晓迎柴晓杰薛飞李秀娟丛玉婷
- 关键词：盐生杜氏藻原核表达纯化
- 盐藻DsRab基因的载体构建、原核表达及亚细胞定位分析
- 盐生杜氏藻(Dunaliella salina)是一类单细胞海藻,无细胞壁,是只有一层膜包被的原生质体结构。盐藻作为耐盐模式生物,其短时间耐盐方式已有深入了解,主要是离子泵调节和甘油合成,但长时间盐胁迫下,相关基因被诱导...
- 李秀娟
- 关键词：盐藻RAB蛋白原核表达亚细胞定位
- 文献传递
- 盐藻小G蛋白DsRab的原核表达及纯化被引量：1
- 2014年
- 前期对盐藻小G蛋白基因DsRab研究表明,在盐胁迫诱导下该基因转录水平明显提高。为进一步研究该蛋白在盐藻耐盐机制中的作用,PCR扩增DsRab的开放阅读框(ORF),并将其克隆至带有GST标签的原核表达载体pGS-21a,得到重组表达载体pGS-21a-DsRab。将重组表达载体转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,并优化诱导表达条件,利用GST-SefinoseTM Kit进行纯化,用SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果表明,成功构建了重组表达载体pGS-21a-DsRab,SDS-PAGE结果显示得到的蛋白与预期分子量相符,并且纯度较高;Western blot检测结果初步证明该融合蛋白为GST-DsRab。
- 李秀娟柴晓杰陶晓迎赵欢丛玉婷
- 关键词：盐藻GST原核表达纯化
