汪云霞
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
- 供职机构：广州医学院更多>>
- 发文基金：广州市科技计划项目广州市医药卫生科技项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 阳离子脂质体对HepG2.2.15细胞病毒分泌、毒性及凋亡的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨阳离子脂质体作为基因治疗药物载体对HepG2.2.15细胞的病毒分泌、毒性及凋亡的研究。方法:以2.5、5.0、7.5、10.0μL/mL浓度的阳离子脂质体转染HepG2.2.15细胞,共温育10d,ELISA法检测细胞上清中HBsAg和HBeAg含量的变化。转染48h后,MTT法检测阳离子脂质体对细胞的毒性、荧光显微镜检测细胞凋亡情况。结果:各个剂量组阳离子脂质体对HepG2.2.15细胞均有抑制作用,其中10μL/mL组在第10d对HBsAg、HBeAg抑制率分别达31.5%、29.9%,表现出较高的毒性作用。2.5、5.0、7.5、10.0μL/mL阳离子脂质体转染HepG2.2.15细胞后,MTT检测结果显示其细胞存活率分别为82.14%、77.62%、77.4%、61.9%。荧光显微镜下可见各浓度组均有凋亡,且随脂质体剂量增加细胞凋亡数增加。结论:阳离子脂质体能抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg,其毒性及诱导凋亡作用呈剂量和时间依赖性。作为基因治疗药物载体时,剂量宜小于7.5μL/mL。
- 朱晓莹汪云霞邓益斌王燕菲
- 关键词：阳离子脂质体基因治疗药物载体毒性
- bmi-1原癌基因在不同来源CD34^＋细胞的表达被引量：2
- 2008年
- 目的:Bmi-1是一种属于PcG家族的原癌基因,它直接参与细胞生长、增殖的调节,是成体干细胞和白血病干细胞自我更新所必需的。检测原癌基因bmi-1在不同来源CD34+细胞中的表达,探讨其与细胞增殖的关系。方法:实验于2007-03/11在广州医学院生化教研室完成。①实验材料:白血病细胞株SHI-1由苏州大学附属第一医院、江苏省血液病研究所薛永权教授惠赠;脐血由广州医学院附属广州市第一人民医院妇产科提供,实验经产妇知情同意,并经医院伦理委员会批准;外周血采自健康成年自愿捐献者。②实验方法:以CD34免疫磁珠标记急性单核细胞白血病细胞株SHI-1,上柱分选CD34+细胞,脐血单个核细胞以同样的方法标记CD34免疫磁珠标记和分选CD34+细胞,应用流式细胞仪分析分选后CD34+的富集度;将分选前后的CD34+、CD34-SHI-1细胞以相同的密度接种于24孔板,分不同的时间点计数细胞,并绘制生长曲线。选用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞。以正常脐带血和外周单个核细胞为对照,采用半定量RT-PCR法检测bmi-1基因在不同来源CD34+细胞中的表达。结果:①SHI-1细胞分选前后标记CD34-PE、CD38-FITC流式分析显示,分选后CD34+细胞的富集度为99%以上。②SHI-1-CD34+细胞呈缓慢生长趋势,不同于分选前细胞的指数生长状态。③RT-PCR检测显示,bmi-1mRNA在SHI-1-CD34+细胞中的表达高于其在脐血-CD34+与外周血单个核细胞中的表达(P<0.05)。bmi-1mRNA在SHI-1、SHI-1-CD34+、SHI-1-CD34-细胞中表达差异不显著,在脐血-CD34-细胞中弱表达或不表达。结论:bmi-1基因在SHI细胞株CD34+与CD34-细胞中均高表达,说明其与血液细胞的高增殖能力密切相关。
- 张雅容魏亚明许艳丽林秀梅汪云霞王晓华
- 关键词：BMI-1基因CD34^+细胞免疫磁珠流式细胞仪干细胞
- bmi-1小发夹RNA真核表达载体的构建及对LoVo细胞的影响
- 研究背景与目的:
原癌基因bmi-1 /(B-cell specific moloney leukemia virus inser -tion site 1,bmi-1/)是PcG/( Polycomb gr...
- 汪云霞
- 关键词：BMI-1基因逆转录病毒载体
- 文献传递
- 靶向bmi-1真核表达载体的构建及对SW480细胞的增殖研究被引量：1
- 2009年
- 目的:构建针对原癌基因bmi-1的shRNA逆转录病毒表达载体,检测它对大肠癌细胞株SW480增殖的影响。方法:利用载体介导的RNA干扰技术,设计、合成靶向bmi-1基因、编码短发夹RNA的寡核苷酸序列,并设计无义对照序列,构建重组载体pSIREN-bmi-1及pSIREN-bmi-1-c,载体经脂质体2000介导转染SW480细胞,经MTT检测,观察bmi-1表达受抑后对细胞增殖的影响。结果:成功构建了针对bmi-1基因的shRNA表达载体。结论:针对bmi-1基因的shRNA表达载体能够明显抑制结肠癌细胞SW480的增殖能力。
- 汪云霞魏亚明王晓华朱晓莹
- 关键词：BMI-1基因结肠癌细胞短发夹RNA
- bmi-1shRNA逆转录病毒表达载体的构建及稳定转染LoVo细胞系的建立被引量：4
- 2010年
- 目的构建针对原癌基因bmi-1的shRNA逆转录病毒表达载体,建立稳定转染的LoVo细胞系,探讨稳定转染bmi-1shRNA对大肠癌细胞LoVo靶基因表达的影响,为下一步应用RNAi技术治疗打下基础。方法设计合成靶向bmi-1基因编码短发夹RNA的两条寡核苷酸序列,另设计无义对照序列,构建重组载体pSIREN-bmi-1及pSIREN-bmi-1-C,载体经脂质体2000介导转染LoVo细胞,通过嘌呤霉素筛选,建立稳定转染的LoVo细胞系,显微镜观察、MTT检测、荧光定量PCR、Western blot检测bmi-1表达受抑后对细胞的增殖影响。结果成功构建了针对bmi-1基因的shRNA表达载体,建立了稳定转染的LoVo细胞系,bmi-1shRNA对LoVo细胞bmi-1mRNA表达抑制率为80%、bmi-1蛋白抑制率为82%,P<0.05。结论针对bmi-1基因的shRNA表达载体能够明显抑制结肠癌细胞LoVo的增殖能力,bmi-1mRNA与蛋白表达受抑制,但对细胞形态学无明显影响。
- 汪云霞魏亚明王晓华朱晓莹黄颖烽
- 关键词：BMI-1基因转染短发夹RNA
